[发明专利]朱砂兰组织培养方法

权利要求书

1.朱砂兰组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)外植体采集

10-11月是朱砂兰蒴果成熟时期，当蒴果外表转为褐色，达到形态成熟而尚未开裂时采收；时间过早，种子胚发育不全影响发芽率；时间太迟，蒴果破裂，会造成不必要的损失；

(2)消毒灭菌

取朱砂兰未开裂的蒴果，流水冲洗25-35min，在超净工作台上用70-75％酒精处理25-35s后再用0.1-0.2％升汞液浸泡10-15min，倒去升汞溶液，用无菌水冲洗4-5次，每次不少于4-5min，后用无菌纸吸干果实表面水分；

(3)播种

在无菌条件下，将灭菌过的朱砂兰种子播种在人工配制的播种培养基上；培养30-40天，待培养物膨大形成原球体时，即开始下一阶段；

(4)增殖

将上一步所得培养物在无菌条件下转接到人工配制的增殖培养基上，经过培养30-40天左右，膨大的原球体开始出现幼嫩的朱砂兰小苗，待小苗长到常规壮苗程序所需高度时可将苗转接到壮苗培养基上；

(5)壮苗

将上一步所得的朱砂兰小苗在无菌条件下转接到人工配制的壮苗培养基上；经过25-35天培养的小苗开始出现2-3片叶子，形成独立的植株，待植株长到常规生根程序所需高度时可将其转接到生根培养基上；

(6)生根

将上一步所得的朱砂兰壮苗在无菌条件下转接到生根培养基上，经过培养30-50天植株开始出现长高和5-6片叶子，在苗的基部长出多条肉质、绿色气生根，最后形成完整的植株；最终生根率高达80-95％；

所述的种子萌发培养基包括：MS+苄基腺嘌呤6-BA 0.1-0.5mg/L+1-3％蔗糖；

所述的增殖分化培养基包括：MS+萘乙酸NAA 0.1-0.3mg/L+6苄基腺嘌呤6-BA0.8-1.2mg/L+1-3％蔗糖；

所述的壮苗培养基包括：MS+10-15％香蕉+萘乙酸NAA 1-2mg/L+1-3％蔗糖；

所述的生根培养基包括：MS+10-15％香蕉+萘乙酸NAA 1.5-2.5mg/L+吲哚丁酸IBA 0.8-1.2mg/L+1-3％蔗糖。

2.根据权利要求1所述的朱砂兰组织培养方法，其特征在于所述的MS基本培养基是由大量元素、微量元素和有机成分组成。

3.根据权利要求1所述的朱砂兰组织培养方法，其特征在于，所述种子萌发培养基成分优选为MS+苄基腺嘌呤6-BA 0.1mg/L+2％蔗糖。

4.根据权利要求1所述的朱砂兰组织培养方法，其特征在于，所述增殖分化培养基成分优选为MS+萘乙酸NAA0.2mg/L+苄基腺嘌呤6-BA 1mg/L+2％蔗糖。

5.根据权利要求1所述的朱砂兰的组织培养方法，其特征在于，所述壮苗培养基成分优选为MS+10％香蕉+萘乙酸NAA 1.5mg/L+2％蔗糖。

6.根据权利要求1所述的朱砂兰组织培养方法，其特征在于，所述生根培养基成分优选为MS+10％香蕉+萘乙酸NAA 2mg/L+吲哚丁酸IBA 1mg/L+2％蔗糖。

7.根据权利要求1所述的朱砂兰的组织培养方法，其特征在于，各培养基PH值为5.5-6.0，培养温度为23-25℃，光照强度1600-2000LX，光照时间9-12h/d。