[发明专利]一株调节人肠道中短链脂肪酸和总胆汁酸代谢的益生菌及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一株可以调节人肠道中短链脂肪酸(SCFA)和总胆汁酸(TBA)代谢的益生菌。应用高效液相色谱(HPLC)技术检测发现：每日服用该菌株可以促进肠道中短链脂肪酸的代谢，应用酶联免疫分析(ELISA)技术检测发现：每日服用该菌株可以抑制肠道中总胆汁酸的代谢，从而达到调节肠道菌群平衡、改善肠道功能及调控基因表达等效果。 

背景技术

在人的肠道内生存着1000多种总数在万亿以上的微生物，由这些微生物产生的化学物质会影响人体的肠道菌群平衡、肠道功能及免疫机制，许多肠道微生物可防止胃肠内的有害菌生长和防止感染。肠道微生物在人体健康和疾病方面有重要作用，如生理功能、营养、免疫反应等均和肠道菌群密切相关。 

益生菌是“当摄入一定量时能对宿主健康有作用的微生物活体”。早在上个世纪初(1907年)著名细菌学家诺贝尔奖得主梅切尼科夫即提出益生菌可以延年益寿的假说。益生菌在肠道内的大量繁衍可调节紊乱的肠道菌群结构并提高机体的免疫能力进而帮助恢复健康水平。益生菌主要包括乳杆菌类、双歧杆菌类和革兰氏阳性球菌类。双歧杆菌是于1899年由法国巴斯德研究所的Tissier首次从母乳喂养婴儿粪便中分离出来的。益生菌的益生作用主要是通过直接或者间接的调整宿主肠道微生物的组成，激活宿主内源性微生物群或者免疫系统的活性来实现的。 

短链脂肪酸主要来自大肠内碳水化合物发酵和蛋白质降解，肠道菌群通过产生SCFA，对人体多个器官和代谢产生较大的影响。SCFA是肠道中抑制病原微生物的重要因素，也可以促进钠离子吸收、结肠细胞增殖和粘膜生长，提供代谢能源，增加肠血流，刺激胃肠激素生成，是结肠粘膜的重要营养素。最早Haring等通过肠道灌注SCFA治疗慢性结肠炎取得很好的效果。Blottiere等研究表明SCFA通过直接调节基因影响肠道细胞增殖，对维持肠粘膜细胞健康非常重要。临床研究表明，SCFA能较强地维护肠道形态及功能，并具有一定的治疗作用，可以缓解和治疗转流性结肠炎、远段溃疡性结肠炎、袋囊炎、放射性结肠炎、短肠综合征、全肠外营养所致肠失用等多种肠道外科疾病。通过测定生物基质中SCFA的水平可以整体诊断体内厌氧菌的变化，SCFA的含量也可以反映细菌活性。总之，SCFA对机体具有调节肠道菌群平衡、改善肠道功能等重要作用，因 此SCFA的测定对营养、微生物和环境的研究有重要的意义。 

SCFA含量的早期测定方法是滴定法，该法特异性不强，准确度差。随着色谱技术的发展，高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)以及毛细管电泳(CE)已广泛用于SCFA的测定。但极性大、挥发性强和水溶性大的特点使SCFA难以定量，生物基质的复杂性也更增加了定量工作的难度。 

胆汁酸在肝脏中合成，贮存于胆囊中，释放到小肠中。总胆汁酸(TBA)包括正常人肝脏合成的胆酸(CA)、鹅脱氧胆酸(CDCA)和代谢中产生的脱氧胆酸(DCA)、少量的石胆酸(LCA)及微量熊脱氧胆酸(UDCA)。在人粪便中的胆汁酸主要是DCA和LCA等次级胆汁酸。在某些情况下，DCA会在血液、胆汁和粪便中聚积，这就增加了患胆结石和结肠癌的风险，而且次级胆汁酸是恶性肿瘤的启动子并对人体危害众多。临床研究表明，在肠道细菌、DCA含量和胆结石疾病之间存在着一定程度的联系。细菌在人及动物体内会受到胃酸、肠道胆汁酸等环境胁迫压力，适应并耐受胆汁酸的毒性是人及动物肠道细菌保证自身存活的主要因素。所以更好地了解胆汁酸对细菌的抑制机制，对于发展在肠道高浓度游离胆汁酸情况下可存活的微生态制剂也很重要。近年来，乳酸菌或双歧杆菌(Bifidobacterium)经常作为益生菌或微生态制剂添加到人体中，它们可以很好的应对肠道内的游离型胆汁酸的胁迫。 

发明内容

本发明的目的是提供一株调节肠道中短链脂肪酸和总胆汁酸代谢的益生菌及检测方法。 

本发明的目的通过如下技术方案实现：一株调节人肠道中短链脂肪酸和总胆汁酸代谢的益生菌，其特征在于所述益生菌（Lactobacillus plantarum P8）分离自内蒙古牧民手工制作的酸奶中，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名：植物乳杆菌，保藏号：CGMCC No.5468，保藏日期为：2011年11月18日。 

调节人肠道中短链脂肪酸和总胆汁酸代谢的益生菌的检测方法，其特征是包括下列步骤： 

(I)、高效液相色谱用于短链脂肪酸的测定 

(1)仪器和材料