[发明专利]口蹄疫病毒VP1基因重组小反刍兽疫病毒活载体疫苗构建及应用

说明书

技术领域

本发明涉及重组病毒疫苗领域，更具体地，本发明涉及一种表达口蹄疫病毒VP1基因(编码VP1蛋白)的重组小反刍兽疫病毒疫苗。本发明还公开了制备所述重组小反刍兽疫病毒疫苗的方法和该重组小反刍兽疫病毒疫苗在制备预防小反刍兽疫和/或口蹄疫的疫苗中的应用。

背景技术

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants，PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus，PPRV)引起的一种高度接触性传染性疾病[1](参见后文参考文献列表)，严重危害山羊、绵羊、和野生小反刍兽[2]等动物，甚至曾经引起水牛发病[3]。

PPRV的致死率为70-80％，在新的OIE分类中，被列为重要经济动物疾病，且疫情必须通报OIE。PPR长期以来一直在非洲、中东、中亚、南亚及东南亚地区危害流行，和我国西部接壤的巴基斯坦[4]、塔吉克斯坦[5]近些年都有流行爆发。2007年PPRV传入我国西部边境地区，导致局部疫情，对我国的畜牧养殖业形成严重威胁。我国山羊和绵羊的饲养量数以亿计，但对于PPR的防控技术和经验不足，病原的研究和技术储备缺乏，给我国的PPRV的防控带来了极大的难度和挑战，迫切需要我们抓紧PPRV疫苗研发、诊断技术、监测、致病机制等研究，其中疫苗研发是重中之重。

PPRV属副粘病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)成员，与牛瘟病毒(Rinderpest virus，RPV)同属，基因组进化与抗原性关系密切，具有共同的中和抗体表位。PPRV为单链负股RNA病毒，由15948个碱基组成，不分节段。病毒粒子内主要含有6种结构蛋白，即核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素蛋白(H)和多聚酶大蛋白(L)。病毒囊膜表面的F和H蛋白为PPRV诱导中和抗体形成的主要免疫原，N蛋白不诱导中和抗体，但具有良好的免疫原性，是用于诊断的主要抗原[6-8]。

针对PPR最早使用的疫苗是牛瘟弱毒病毒(Rinderpest Virus，RPV)，虽然能够提供免疫保护，但不能够产生PPRV的中和抗体[9]，后被经Vero细胞传代致弱的PPRV弱毒疫苗株(Nigeria75/1)所替代，后者能够产生较高的PPRV的中和抗体，提供坚强的免疫保护力。

把PPRV免疫保护抗原(H和F蛋白)的基因重组至山羊痘病毒基因组，则构建成PPRV重组山羊痘病毒疫苗[10-13]。以PPRV重组山羊痘病毒免疫山羊，不但能够提供足够的免疫保护抵抗PPRV强毒的攻击[10-13]，而且还可以利用PPRV N蛋白作为抗原，很容易地分免疫感染和自然感染，不影响血清学监测。本研究室采用我国分离的山羊痘病毒疫苗株，分别构建成了PPRV H和F基因重组山羊痘病毒疫苗，疫苗防山羊痘和PPRV两种疾病，为我国的PPR的防控提供了一种重要的选择[12，13]。但PPRV重组痘病毒疫苗由于采用皮内注射和两次免疫程序[12，13]，劳动强度大，是其一大缺憾。

口蹄疫(foot and mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus，FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性人畜共患传染病，世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的疾病。该病传播途径多，传播速度快，在世界范围内曾多次发生流行，给各国造成了严重的经济损失。

口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus，FMDV)属于小RNA病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病毒属(Aphthovirus)的成员，共有A、O、C、Asia 1、SAT1、SAT2和SAT37个血清型，型与型之间不能产生交叉保护，且从临床症状上无法区别FMDV的血清型，这给疫苗免疫、诊断和防控带来困难。FMDV基因组为单股正链RNA，约有8.5kb。基因组的中部是一个大的开放阅读框(ORF)，编码病毒的多聚蛋白，该聚蛋白经裂解后形成L前导蛋白、P1区结构蛋白、P2区和P3区非结构蛋白。FMDV P1区结构蛋白最终成熟裂解为4种结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4，这4种结构蛋白构成了FMDV衣壳，其抗原表位(antigenic epitope)多位于衣壳蛋白上，决定着病毒的抗原性。