[发明专利]免疫亲和沉淀法纯化抗体有效
| 申请号: | 201210054083.3 | 申请日: | 2012-03-05 |
| 公开(公告)号: | CN102942627A | 公开(公告)日: | 2013-02-27 |
| 发明(设计)人: | 贺佑丰;袁鹏飞;吕东川;谷泽亮;张庚宽;王丁泉 | 申请(专利权)人: | 北京北方生物技术研究所 |
| 主分类号: | C07K16/00 | 分类号: | C07K16/00;C07K1/32 |
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| 地址: | 100076 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 免疫 亲和 沉淀 纯化 抗体 | ||
1.一种免疫亲和沉淀法用于纯化抗体,其特征包括以下步骤:采用含羧基(-COOH)的以丙烯酰胺和丙烯酸为单体的共聚物固相微球作为固相载体,同含有氨基(-NH2)的抗原混合,再加入偶联剂——1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(EDC),室温震荡反应过夜,从而将抗原连接到固相载体上,形成抗原-固相载体的免疫吸附剂;然后,将待纯化的抗体原液与免疫吸附剂混合,2~8℃放置过夜,抗原抗体产生特异性结合,形成抗体-免疫吸附剂结合物,通过离心洗涤,除去未结合的其他混合物,得到单一的抗体-免疫吸附剂结合物;再降低体系中的pH值,则抗体被解离到溶液中,通过离心分离上清后对上清透析,即得到纯化的抗体;免疫吸附剂可通过离心洗涤后悬浮于保存液中,2~8℃放置,可重复用于纯化抗体。
2.根据权利要求1所述的免疫亲和沉淀法,其特征在于,采用以丙烯酰胺和丙烯酸为单体的共聚物固相微球作为免疫亲和沉淀法的固相载体。
3.根据权利要求1所述的免疫亲和沉淀法,其特征在于,固相微球与抗原的连接是通过固相微球上的羧基与抗原的氨基形成的共价键连接。
4.根据权利要求1所述的免疫亲和沉淀法,其特征在于,采用碳二亚胺(EDC)作为固相载体与抗原的偶联剂。
5.根据权利要求1所述的免疫亲和沉淀法,其特征在于,采用离心方法分离纯化过程中的固相和液相,包括用离心方法分离解离后的抗体与固相免疫吸附剂。
6.根据权利要求1所述的免疫亲和沉淀法,其特征在于,免疫吸附剂与抗体的解离是通过降低体系中的pH值到2~3实现的。
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