[发明专利]一种循环血DNA提取方法和相关的循环血DNA提取试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及DNA提取技术领域，特别涉及循环血DNA提取技术领域，具体是指一种循环血DNA提取方法和相关的循环血DNA提取试剂盒。

背景技术

人血浆中存在游离基因组DNA，这些DNA分子是在细胞凋亡或死亡后释放到外周血中的，检测分析游离gDNA有很重要的临床意义：许多疾病状态下，比如中风、心肌梗塞、糖尿病及许多恶性肿瘤患者血浆游离gDNA会显著升高。因此血浆游离gDNA浓度可以作为疾病进展的一个临床指标，对于恶性肿瘤患者血浆中游离gDNA的检测分析更具有重要意义，因为这些gDNA分子直接来自肿瘤细胞，对其进行基因分析可以获得肿瘤恶性程度的全部信息，可以为肿瘤的诊断和治疗提供重要的依据。由于在孕妇外周血中存在胎儿的游离gDNA，因此，血浆游离gDNA分析还可以作为产前诊断的重要方法。

由于血浆游离gDNA片段小，含量低，在提取过程中容易丢失，其浓度在ng/mL水平，无法用紫外分光光度法检测。需要很高的提取效率和稳定的得率才能应用于定量和相关检测。传统的苯酚/氯仿抽提法操作者需要接触苯酚、氯仿这些有害物质，影响人体健康。也有专利采用硅柱吸附法，其原理是利用DNA分子一定盐浓度下能与收集硅柱可逆吸附来提取纯化DNA。但是该方法抽提效率较低，操作繁琐，需要专用的DNA吸附柱，无法反复利用，成本高。

因此，需要一种循环血DNA提取方法，其抽提效率高、操作简便、成本低廉、安全环保。

发明内容

本发明的目的是为了克服上述现有技术中的缺点，提供一种循环血DNA提取方法和相关的循环血DNA提取试剂盒，该循环血DNA提取方法设计巧妙，抽提效率高、操作简便、成本低廉、安全环保，适于大规模推广应用。

为了实现上述目的，在本发明的第一方面，提供了一种循环血DNA提取方法，其特点是，采用酸化预处理的硅珠浊液提取循环血DNA，例如血浆中游离基因组DNA、病毒DNA等等。

所述硅珠浊液可以采用任何合适的方法制备，较佳地，所述硅珠浊液是将硅珠震荡分散在液体中然后经过所述酸化预处理形成。液体可以是任何合适的液体，比如水，或者常规的DNA提取缓冲液等等。

所述酸化预处理可以采用任何合适的方式，较佳地，所述酸化预处理通过加入酸实现。

酸通常是无机酸，例如盐酸、硝酸等等，也可以是有机酸，例如醋酸、甲酸等等。更佳地，所述酸是盐酸。

所述硅珠浊液的pH值小于7即可，较佳地，所述硅珠浊液的pH值为2.0。

为了避免蛋白污染，较佳地，在所述血浆中还加入蛋白酶K。

为了将细胞中的DNA完全释放出来，较佳地，在所述血浆中还加入裂解缓冲液。

所述裂解缓冲液可以是DNA提取所用的常见的裂解缓冲液，更佳地，所述是0.2M Tris-HCl，0.5％SDS，pH 7.0。

采用酸化预处理的硅珠浊液提取循环血DNA之后，还可以进行常规DNA提取后续步骤进行纯化，例如采用洗涤缓冲液洗涤，乙醇重新沉淀等等，这些均是现有技术，这里不再赘述。

在本发明的第二方面，提供了一种循环血DNA提取试剂盒，其特点是，包括用于配制上述的循环血DNA提取方法中使用的硅珠浊液的硅珠。

在本发明的第三方面，提供了一种循环血DNA提取试剂盒，其特点是，包括用于上述的循环血DNA提取方法的硅珠浊液。

本发明的有益效果具体如下：本发明的循环血DNA提取方法采用酸化预处理的硅珠浊液提取循环血DNA，安全无毒，操作者不需接触苯酚，氯仿等有害物质，操作简便，主要仪器只需一架台式离心机，抽提效率高，对循环血中的短DNA抽提效率显著优于过柱法，纯化效率可达70％以上，足以满足常规分子生物学需求，成本低廉，不需要专用的DNA吸附柱，因此，设计巧妙，抽提效率高、操作简便、成本低廉、安全环保，适于大规模推广应用。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例详细说明。应理解，实施例仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制。

实施例1

1 试剂

1.1 二氧化硅粉末SiO₂

室温保存。

1.2 1N HCl

室温保存。用12N浓盐酸配制。

1.3 裂解缓冲液

0.2M Tris-HCl，0.5％SDS，pH 7.0。室温保存。

1.4 蛋白酶K

-20℃冻存，30U/mg。

1.5 洗涤缓冲液