[发明专利]一种用于观察水稻叶鞘组织胼胝质的叶鞘组织制片方法

权利要求书

1.一种用于观察水稻叶鞘组织胼胝质的叶鞘组织制片方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）材料前处理：取分蘖期的水稻叶鞘组织，洗净擦干后迅速用刀片切成0.3～0.5 cm的小段，然后立即放入10%的甘油溶液中，并用真空泵抽气10～20 min，直至叶鞘组织下沉为止；

2）样品固定：在冷台底座先加1滴组织冷冻胶，再将步骤1）得到的叶鞘组织小段垂直置于平放的冷台上，再加2～5滴组织冷冻胶将叶鞘组织小段完全包裹住，并放在冷冻切片机中的样品台上，放置100～140 min后，即可用于冷冻切片；

3）冷冻切片：将粘有叶鞘组织的冷台固定在冷冻切片机的冷台固定槽上，拧紧固定螺丝，并将切片厚度调节旋钮调至切片厚度10μm，箱体最低控制温度为-40℃，切片头最低控制温度为-50℃，摇动旋转手轮进行切片；

4）展片：先将载玻片靠近切片刀，每切一张切片，用毛笔轻轻地将切片移到载玻片上，每块载玻片贴上15～20张切片；

5）染色：贴好切片后，在室温下让冷冻胶稍稍干燥，放入96%酒精浸泡6～10小时后，取出并将酒精晾干，再加入1 ml浓度为1/15 mol/L、pH值为7.0的磷酸缓冲液于切片上，45 min后再加1ml浓度为0.1 mol、pH值为7.0的苯胺蓝染色液，染色60 min后将载玻片缓慢倾斜倒掉染色液；

6）显微观察与拍照：待切片刚刚干燥时，立即在Olympus BX51荧光正置显微镜下用紫外光激发观察到叶鞘组织中的胼胝质，并用该显微镜专用的照相机进行拍照。

2.如权利要求1所述的一种用于观察水稻叶鞘组织胼胝质的叶鞘组织制片方法，其特征在于所述的步骤1）中真空泵为SHZ-CA型循环水式多用真空泵。

3.如权利要求1所述的一种用于观察水稻叶鞘组织胼胝质的叶鞘组织制片方法，其特征在于所述的步骤2）中叶鞘组织小段垂直置于平放的冷台前，先用擦镜纸将其表面上的残余液体吸干。

4.如权利要求1所述的一种用于观察水稻叶鞘组织胼胝质的叶鞘组织制片方法，其特征在于所述的步骤3）中冷冻切片时如冷刀上的霜层较厚，应及时启动除霜程序以除去切片刀上的霜层以防卷片。