[发明专利]肝素黄杆菌肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的冻干保存方法

权利要求书

1.一种肝素酶I和/或II的冻干保存方法，包括下述步骤：

步骤1、制备肝素酶I和/或II溶液；

步骤2、制备保护剂溶液：制备海藻糖溶液以及任选的氯化钙溶液；

步骤3、将步骤2中得到的保护剂溶液和步骤1中得到的肝素酶I、II溶液混合；

步骤4、将混合液冻干。

2.一种肝素酶III的冻干保存方法，包括下述步骤：

步骤1、制备肝素酶III溶液；

步骤2、制备保护剂溶液：制备海藻糖溶液，；

步骤3、将步骤2中获得的保护剂和步骤1中获得的肝素酶III的溶液的混合；

步骤4、将混合液冻干。

3.根据权利要求1或2的冻干保存方法，其中，

步骤1所述的酶溶液中，Tris-HCl缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钙缓冲液等作为溶解上述肝素酶的溶剂。

4.根据权利要求1或2的冻干保存方法，其中，

步骤2所述的保护剂溶液中，Tris-HCl缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钙缓冲液作为溶解上述保护剂的溶剂。

5.根据权利要求1的冻干保存方法，其中，

步骤2所述的冻干保护剂的组成为：氯化钙0-20mM，海藻糖5-10％(w/v)。

6.根据权利要求1的冻干保存方法，其中，

步骤3所述的冻干保护剂，用于肝素酶I的组成为：氯化钙20mM，海藻糖5％(w/v)。

7.根据权利要求1的冻干保存方法，其中，

步骤3所述的冻干保护剂，用于肝素酶II的组成为：氯化钙10mM，海藻糖10％(w/v)。

8.根据权利要求2的冻干保存方法，其中，

步骤3所述的保护剂为：海藻糖10％(w/v)。

9.根据权利要求1的冻干保存方法，包括下述步骤：

步骤1、肝素酶I和/或II溶液的制备：

取制备的肝素酶I和/或II在100倍体积的10mM Tris-HCl缓冲液(pH7.0)中透析过夜，测定活性后，调整浓度至酶活力2-5IU/ml，分别装入1.5ml EP管中；

步骤2、制备保护剂溶液：

预先配制含50％(m/v)海藻糖的10mM Tris-HCl缓冲液(pH7.0)以及任选的含100mM氯化钙的10mM Tris-HCl缓冲液(pH7.0)；

步骤3、混合保护剂溶液和肝素酶I、II溶液：

将适当量的上述氯化钙溶液和海藻糖溶液分别加入到肝素酶溶液中，定容到100ul；振荡摇匀，使氯化钙含量达到0-20mM，海藻糖含量达到5-10％(w/v)；

步骤4、混合液冻干：

将加有保护剂的肝素酶在-70℃冷冻结冰，然后置于冷冻干燥器冻干腔内，抽真空过夜干燥。

10.根据权利要求2的冻干保存方法，包括下述步骤：

步骤1、制备肝素酶III溶液：

取制备的肝素酶III在100倍体积的10mM Tris-HCl缓冲液(pH7.0)中透析过夜，测定活性后，调整浓度至酶活力2-5IU/ml，装入1.5ml EP管中；

步骤2、制备保护剂溶液：

预先配制含50％(m/v)海藻糖的10mM Tris-HCl缓冲液(pH7.0)；

步骤3、混合保护剂溶液和肝素酶III溶液：

将适当量的上述海藻糖溶液加入到肝素酶溶液中，定容到100ul；振荡摇匀，使海藻糖含量达到5-10％(w/v)；

步骤4、混合液冻干：

将加有保护剂的肝素酶在-70℃冷冻结冰，然后置于冷冻干燥器冻干腔内，抽真空过夜干燥。