[发明专利]人类乳头瘤病毒免疫原性多肽、其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及人类乳头瘤病毒免疫原性多肽、其制备方法及应用，尤指具有免疫原性的、能与人类白细胞抗原(HLA)-A1、A2、A3、A11和A24结合的人类乳头瘤病毒HPV16和18的E6和E7多肽序列、这些多肽的制备方法及其用于制备预防和治疗HPV感染和由HPV感染引起的性病和良、恶性肿瘤的药物的应用，属于生物技术领域。

背景技术

乳头瘤病毒(Papillomavirus)可感染多种生物，它具有种属特异性。动物乳头瘤病毒不会感染人类，同样人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)不会感染动物。HPV属于双链脱氧核糖核酸无被膜病毒，有嗜组织特异性，易感染人体皮肤和粘膜的上皮组织，常引起男女肛门生殖器炎症，上皮增生，进而发展为良性肿瘤如尖锐湿疣(又称性病湿疣)，或恶性肿瘤如子宫颈癌。子宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一。据WHO统计，全球现有宫颈癌患者约170万，每年约50万新发病例，20多万死亡病例。我国现有宫颈癌患者约14万，每年新增病例约4万。对于HPV感染病人的传统治疗方法主要有药物和物理治疗两类。其中治疗用药物有普达非任脂、5-氟尿嘧啶、争光霉素和干扰素等；物理治疗有电烙、激光治疗、冷冻外科手术和外科手术切除等方法。现有技术的局限性在于：现有的药物治疗没有特异性，全身用药有明显的副作用，而局部用药又不方便；物理治疗不适用于HPV感染早中期病人，只适用于病人发生了上皮不典型增生和癌肿后的情况，而且会给病人带来痛苦和不良后果。宫颈发展为浸润性肿瘤后通常必须采取部分或全部子宫颈切除手术，这不利于妇女的生育和其它的正常生理功能。在目前的疗法下，尖锐湿疣有20-50％的机会复发，浸润性宫颈癌的死亡率高达60％，复发病例的2年存活率只有5％。子宫颈癌是全球妇女因肿瘤死亡的第二常见原因。由此可见，HPV感染目前还没有一种特异有效的疗法，研发一种特异有效的疗法势在必行。

HPV有130余个不同的亚型，在肛门生殖器普查中发现的HPV约有23种，其中有些常常引起良性病变，称为低危型HPV(low-risk HPV)，如HPV11和HPV6。有些常常引起恶性病变，称为高危型HPV(high-risk HPV)，如HPV16和18。85-90％的子宫颈癌以及35-50％的外阴癌患者呈HPV16和HPV18阳性(W.J.van Driel，et al，Eur J Cancer，35：946-952，1999)。子宫颈癌的发生通常在HPV感染十年以后，多发生于生育期妇女。有报导称大约25-33％的子宫颈癌发生于尖锐湿疣后二十五年。超过百分之九十四的子宫颈癌患者的病灶中可以发现HPV DNA，说明HPV感染与子宫颈癌相关。1992年WHO宣布高危型人乳头瘤病毒感染是引起宫颈癌变的首要因素。随着HPV与宫颈癌之间病因学联系的明确，HPV防治研究的重点转向HPV疫苗的研究和开发。

HPV的基因组含有8000个碱基对，包括早期和晚期基因。早期(E)基因编码E1、E2、E4、E5、E6、E7等早期蛋白，参与DNA复制，蛋白质转录和细胞转化(transformation)，晚期(L)基因负责指导合成病毒衣壳蛋白(L1和L2)。E6基因表达的蛋白能够与p53蛋白结合，E7基因表达的蛋白能够与视网膜母细胞瘤(Rb)蛋白结合。p53和Rb蛋白是肿瘤抑制蛋白，在正常情况下它们参与控制细胞的分裂和增生。E6和E7蛋白与其结合后使其失活，激活细胞转录机制，使被感染细胞进入细胞增殖周期，增生转化和癌变。由于这两个癌基因只在HPV转化的恶性细胞中持续表达，而在正常组织中不表达。因此，属于肿瘤特异性抗原，是进行肿瘤免疫治疗的理想靶抗原。此外，还发现HPV E6和E7蛋白中含有MHC I类限制性T细胞抗原决定簇(MHC class I restricted T cell epitopes)，因此，这奠定了一种设计以E6和E7抗原决定簇为内容的、用于预防和治疗HPV感染及其引起的良性或恶性肿瘤疫苗的基础。