[发明专利]EDDP胶体金检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及胶体金检测领域，具体涉及一种EDDP胶体金检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

美沙酮(methadone)为阿片类药物，在第二次世界大战时期由德国科学家合成，一般作为吗啡的代替药物用于癌症晚期等病人的镇痛治疗，其药物作用持续时间长、镇痛效力强、口服有效，在使用充分剂量时可以减少或消除依赖者对阿片类药物的渴求；与同类药物间具有交叉耐受性，使得随后使用的阿片类药物的作用降低或不能发挥作用。

然而，据有关调查显示，90％以上的美沙酮服用者会出现不良反应，不良反应的临床表现和发生率具体如下：

因此在实施美沙酮替代治疗时应特别慎重。定时对患者的尿液进行毒品含量检测，是比较有效的监测服用剂量的方法。目前，根据胶体金法、酶联免疫法、化学发光法等制备的美沙酮检测试剂盒因操作简单、判读快速、携带方便等优势已有广泛的应用。

人体内的美沙酮在肝脏内经生物转化后，发生去甲基化，大量形成无药理活性的吡咯啶(pyrrolidine)衍生物，主要为2-亚乙基-1，5-二甲基-3，3-二苯基吡啶烷(EDDP)，美沙酮主要以该种形式经粪便和尿排出，各种结构的美沙酮以原形排出的量仅为2.5％-6.0％，单纯对美沙酮进行检测易造成对服用量的不完全或错误估计。因此，开发一种快速、灵敏、特异性高的EDDP检测试剂盒，能提高美沙酮检测的准确度，对临床医生以及公安机关开展美沙酮药物滥用的监督检测起到重要的作用。

胶体金免疫层析技术是近年来发展起来的一种独特的免疫诊断技术，由于其具有特异性强、灵敏度高、简单快速、易于操作、结果容易判读，无需附加仪器设备等优点而被广泛应用。

发明内容

本发明的目的是从提高检测灵敏度出发，提供一种既方便又快速的EDDP(2-亚乙基-1，5-二甲基-3，3-二苯基吡啶烷)胶体金快速检测试剂盒。

本发明一方面公开了一种EDDP胶体金检测试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸；所述滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于所述衬底上；所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的抗EDDP单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有EDDP-牛血清白蛋白复合物的检测线和包被有羊抗鼠IgG的质控线。

较优的，所述胶体金的颗粒大小为39～42nm。

较优的，所述胶体金是由两步还原法制备获得。

更优的，所述两步还原法的步骤为：

a)第一次还原氯金酸溶液：制备浓度为0.0004-0.0005mol/L的HAuCl₄水溶液，加热煮沸20-30分钟，之后边搅拌边加入柠檬酸三钠水溶液，HAuCl₄与柠檬酸三钠的摩尔比为1∶8～9，超声振荡2-3分钟后冷却至室温，即制得14～16nm粒径的胶体金原溶液；

b)第二次还原氯金酸溶液：将第一步制得的胶体金原溶液放置4.0℃水浴中保持温度恒定，随后按胶体金原溶液与HAuCl₄水溶液体积比1∶1.9～2.0加入4.0℃的0.003-0.004mol/LHAuCl₄水溶液，随后立即边搅拌边滴加4.0℃的抗坏血酸与PVP的混合水溶液，加入的抗坏血酸与本步骤加入的HAuCl₄的摩尔比为25～26∶1，加入的PVP与本步骤加入的HAuCl₄的重量比为1∶2.0～2.1，反应中保持温度恒定，搅拌至反应完全，溶液呈透明的酒红色，制得39-42nm粒径的胶体金溶液；

两步还原法中，配置各种水溶液均采用双蒸水。

最优的，步骤a)中，加入柠檬酸三钠水溶液的浓度为0.01-0.02mol/L。

最优的，步骤a)中，超声震荡的频率为20-30KHZ。

最优的，步骤b)中，抗坏血酸与PVP的混合水溶液的滴加速度为1-2滴/s。

最优的，步骤b)中，所述抗坏血酸与PVP的混合水溶液中，抗坏血酸的浓度为0.017-0.019mol/L，PVP的浓度为0.137-0.139g/L。

步骤b)中，搅拌反应约为50-70分钟。

采用上述方法制得的胶体金清亮透明，粒径尺寸均一，无凝集颗粒，基本未发现非球形粒子。

较优的，所述免疫胶体金纸片是经过预处理的玻璃纤维纸，所述预处理的预处理液包括0.5～0.8v％Tween-20，12～18w/v％蔗糖，溶剂为水。