[发明专利]EDDP胶体金检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种EDDP胶体金检测试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸；所述滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于所述衬底上，其特征在于，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的抗EDDP单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有EDDP-牛血清白蛋白复合物的检测线和包被有羊抗鼠IgG的质控线。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述胶体金的颗粒大小为39～42nm，所述胶体金是由两步还原法制备获得。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫胶体金纸片是经过预处理的玻璃纤维纸，所述预处理的预处理液包括0.5～0.8v％Tween-20，12～18w/v％蔗糖，溶剂为水。

4.如权利要求1-3任一权利要求所述的EDDP胶体金检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1)两步还原法制备胶体金；

2)用步骤1)制备的胶体金标记抗EDDP单克隆抗体，获得胶体金标记的抗EDDP单克隆抗体；

3)免疫胶体金纸片的制备：预处理玻璃纤维纸；稀释步骤2)获得的胶体金标记的抗EDDP单克隆抗体，得到免疫胶体金溶液；用所述免疫胶体金溶液包被预处理过的玻璃纤维纸，获得免疫胶体金纸片；

4)将EDDP-牛血清白蛋白复合物和羊抗鼠IgG分别喷在硝酸纤维素膜检测线和质控线的位置上，烘干备用，制得免疫硝酸纤维素膜；

5)将滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁制得试剂条；

6)将试剂条装入塑料盒，即获得EDDP胶体金检测试剂盒。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述两步还原法为：

a.第一次还原氯金酸溶液：制备浓度为0.0004-0.0005mol/L的HAuCl₄水溶液，加热煮沸20-30分钟，之后边搅拌边加入柠檬酸三钠水溶液，HAuCl₄与柠檬酸三钠的摩尔比为1∶8～9，超声振荡2-3分钟后冷却至室温，即制得14～16nm粒径的胶体金原溶液；

b.第二次还原氯金酸溶液：将第一步制得的胶体金原溶液放置于4.0℃水浴中保持温度恒定，随后按胶体金原溶液与HAuCl₄水溶液体积比1∶1.9～2.0加入4.0℃的0.003-0.004mol/L HAuCl₄水溶液，随后立即边搅拌边滴加4.0℃的抗坏血酸与PVP的混合水溶液，加入的抗坏血酸与本步骤加入的HAuCl₄的摩尔比为25～26∶1，加入的PVP与本步骤加入的HAuCl₄的重量比为1∶2.0～2.1，反应中保持温度恒定，搅拌至反应完全，溶液呈透明的酒红色，制得39-42nm粒径的胶体金溶液；

两步还原法中，配置各种水溶液均采用双蒸水。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤a中，加入的柠檬酸三钠水溶液的浓度为0.01-0.02mol/L，超声震荡的频率为20-30KHZ。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤b中，所述抗坏血酸与PVP的混合水溶液中，抗坏血酸的浓度为0.017-0.019mol/L，PVP的浓度为0.137-0.139g/L。

8.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)免疫胶体金纸片的制备为：

A.用喷金缓冲液稀释胶体金标记的抗EDDP单克隆抗体，获得OD₅₄₀值为1.5的免疫胶体金溶液；

B.用预处理液浸泡玻璃纤维纸，干燥后，再用免疫胶体金溶液喷涂预处理后的玻璃纤维纸，干燥，制得免疫胶体金纸片。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤A中的喷金缓冲液配方如下：8～12v％1.0M Tris液，0.2～0.4w/v％聚乙二醇20000，0.15～0.25w/v％牛血清白蛋白，0.1～0.3w/v％脱脂牛奶，0.25～0.35w/v％酪蛋白，和0.02～0.08w/v％叠氮化钠，用盐酸调节pH至8.5±0.05，余量为水。