[发明专利]用于苏丹红Ⅰ和对位红检测的单克隆抗体及酶联免疫方法与试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种能识别苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红的单克隆抗体和一种用于动物源性食品中苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红检测的酶联免疫方法(ELISA)与试剂盒。 

背景技术

苏丹红染料和对位红均属于偶氮类染料，是常见的红色染料，由于这类染料含有芳香族结构，进人人体后可被分解还原成芳香胺，形成致癌的芳香胺化合物，严重危害到人类健康。研究表明，苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ是一种潜在的致癌剂，可引发鼠肝脏、膀胱和脾脏等脏器的肿瘤，因此，国际癌症研究中心将其列为三类致癌物。对位红也被怀疑具有致癌性，自1995年起，包括我国在内的许多国家均颁布了法律禁止这类物质作为食品添加剂使用。 

因此，建立分析方法以监控苏丹红和对位红的违法使用尤显重要。目前HPLC是最常用的方法，但是需要配备昂贵的仪器和专业性强的操作人员，样品的前处理复杂，检测时间长，不利于大批量样品的筛选，不能在现场进行快速的检测。 

相对于仪器分析法，免疫学分析法具有操作简单、快速、灵敏度高、特异性强、检测费用低等优点，适用于大批量样品的初筛，目前对于苏丹红和对位红的免疫学检测方法较少。申请号为200810201463.9的中国专利公开了一种单克隆抗体的制备及其用途，该专利以羧基苏丹红为半抗原，分别以牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)为载体蛋白与半抗原偶联制备免疫原和包被原；经动物免疫和细胞筛选，获得了保藏编号为CCTCC NO：C200813的单克隆细胞株，该细胞株分泌的单克隆抗体与苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红的交叉反应率分别为100％和20％，可用于番茄酱等食品中苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ的检测。 

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种能识别苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红的单克隆抗体。 

本发明的第二个目的是利用该单克隆抗体，建立一种能检测动物原性食品中苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红的酶联免疫方法。 

本发明的第三个目的是提供一种能检测动物源性食品中苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红的酶联免疫试剂盒。 

本发明的第四个目的是提供所述单克隆抗体在制备检测动物源性食品中苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红的酶联免疫试剂盒中的应用。 

本发明的第五个目的是提供含有所述单克隆抗体的试剂盒在动物源性食品中苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红检测中的应用。 

本发明是通过以下技术方案实现的： 

一种能识别苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCCNO：C201185的杂交瘤细胞SU I/1H7所分泌的。 

上述杂交瘤细胞SU I/1H7，保藏在位于湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏号为CCTCC NO：C201185。 

所用的免疫原是由半抗原1-(4-羧基苯偶氮基)-2-萘酚与牛血清白蛋白偶联制备的。 

进一步，本发明提出了一种适用于苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红检测的酶联免疫方法，具体步骤如下： 

(1)将半抗原1-(4-羧基苯偶氮基)-2-萘酚与牛血清白蛋白偶联得到免疫原； 

(2)将半抗原1-(4-羧基苯偶氮基)-2-萘酚与卵清蛋白偶联得到包被原； 

(3)利用步骤(1)的免疫原免疫小鼠，通过细胞融合与筛选得到保藏号为CCTCC NO：C201185的杂交瘤细胞SU I/1H7； 

(4)用保藏号为CCTCC NO：C201185的杂交瘤细胞SU I/1H7制备单克 隆抗体； 

(5)用步骤(2)的包被原包被固相载体(如酶标板)； 

(6)称取均质后的动物组织样品，用乙腈提取后，取乙腈层用氮气吹干，残渣用含0.05体积％吐温20的10mM PH为7.4的三羟甲基胺基甲烷-HCl溶液(Tris-HCl溶液)溶解，得到待测物； 

(7)取待测物进行酶联免疫检测。 

步骤(6)含0.05体积％吐温20的10mM PH为7.4的三羟甲基胺基甲烷-HCl溶液(Tris-HCl溶液)的配制方法为：准确称取三羟甲基胺基甲烷(Tris)1.211g，加入少量水搅拌溶解完全，至950mL，搅拌条件下用浓盐酸调pH值至7.4，再加0.5mL吐温20溶解，定容至1000mL。 

本发明以上述单克隆抗体和包被原作为核心试剂与常规的其他试剂组合，制成了能检测动物源性食品中苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红的酶联免疫试剂盒，结合上述酶联免疫方法，实现了对动物源性食品中苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅰ和对位红的酶联免疫检测。