[发明专利]用于检测庆大霉素和西索霉素的单克隆抗体及酶联免疫方法与试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种能识别庆大霉素和西索霉素的单克隆抗体以及用于检测庆大霉素和西索霉素的的酶联免疫分析方法与试剂盒。

背景技术

庆大霉素和西索霉素属于氨基糖苷类抗生素(AMGs)，由于这类抗生素易在肾皮质和内耳外淋巴液蓄积而引起耳毒性和肾毒性，以及由氨基糖苷类钝化酶产生的微生物耐药株较为严重，因此其在动物源性食品中的残留检测日益引起人们的重视。酶联免疫分析(ELISA)方法由于简单、快速、灵敏、特异等优点而被逐渐广泛应用于AMGs的快速残留检测领域。但目前的ELISA方法主要集中在单残留检测方面，用一种抗体同时检测结构不同的AMGs的ELISA方法很少。

申请号为200710064346.8的发明专利公开了一种检测庆大霉素药物的酶联免疫试剂盒及方法，该专利将庆大霉素和载体蛋白，载体蛋白为：鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白，采用戊二醛法或碳二亚胺法进行偶联得到免疫原和包被原，所制备的多克隆抗体和单克隆抗体只能识别庆大霉素，而且其样品的检测时间较长。申请号为200920246849.1的发明专利公开了一种庆大霉素ELISA检测试剂盒，该专利采用直接活化蛋白的方法偶联庆大霉素和牛血清白蛋白(bovine serum albu分钟，BSA)获得免疫原，同样的方法将庆大霉素和甲状腺蛋白偶联获得包被原，所制备的单克隆抗体同样仅能识别庆大霉素，而且其样品处理时间较长，试剂没有进行优化。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种能识别庆大霉素和西索霉素的单克隆抗体。

本发明的第二个目的是利用该单克隆抗体，建立一种能用于庆大霉素和西索霉素检测的酶联免疫方法。

本发明的第三个目的是提供一种用于庆大霉素和西索霉素检测的试剂盒。

本发明的第四个目的是提供所述单克隆抗体在制备检测庆大霉素和西索霉素的酶联免疫试剂盒中的应用。

本发明的第五个目的是提供含有所述单克隆抗体的试剂盒在动物组织庆大霉素和西索霉素残留检测中的应用。

本发明通过以下技术方案实现：

一种能识别庆大霉素和西索霉素的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCC NO：C201145的杂交瘤细胞EDC/2D5所分泌的。

上述杂交瘤细胞EDC/2D5，保藏在位于湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC NO：C201145。

所用的免疫原是由半抗原庆大霉素与牛血清白蛋白偶联制备的。

进一步，本发明提供了一种用于庆大霉素和西索霉素检测的酶联免疫方法，该方法包括免疫原、包被原、抗体的制备以及样品的处理和检测等步骤，具体如下：

(1)将半抗原庆大霉素与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到免疫原；

(2)将半抗原庆大霉素与卵清蛋白(OVA)偶联得到包被原；

(3)利用步骤(1)的免疫原免疫小鼠，通过细胞融合与筛选得到保藏号为CCTCC NO：C201145的杂交瘤细胞EDC/2D5；

(4)用保藏号为CCTCC NO：C201145的杂交瘤细胞EDC/2D5制备单克隆抗体；

(5)用步骤(2)的包被原包被固相载体(如酶标板)；

(6)将待测样品用2％三氯乙酸处理，离心取上清，调pH值，即为待测物溶液；

(7)对步骤(6)的待测物溶液进行酶联免疫检测。

步骤(6)中2％三氯乙酸的组分及配比为：准确称取三氯乙酸20.0g，先加少量双蒸水溶解，再定容至1000mL。

本发明以上述单克隆抗体和包被原作为核心试剂与常规的其他试剂组合，制成了能检测庆大霉素和西索霉素的酶联免疫试剂盒，结合上述酶联免疫方法，实现了对庆大霉素和西索霉素的酶联免疫检测。

本发明的主要优点是：

1、本发明制备的单克隆抗体能同时识别庆大霉素和西索霉素，而现有技术仅能单一识别庆大霉素。

2、本发明建立的ELISA方法检测时间短，检测效率高。

3、本发明涉及的组织样品处理方法简单，无需昂贵的仪器，无需有机试剂，对操作者无健康危害，且仅需要普通离心机即可，适合在基层操作。

附图说明

图1为本发明中载体蛋白BSA的基质辅助激光解吸法检测的质谱图。

图2为本发明中免疫原的基质辅助激光解吸法检测的质谱图，结合图1用于说明半抗原庆大霉素与BSA的偶联效果。