[发明专利]一种纳米荧光微球，其制备方法及其用作免疫层析方法的标记物的用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种适用作免疫层析的标记物的纳米荧光微球及其制备方法和用途。

背景技术

在生物和医学检测中，经常用到免疫分析法，它包括放射免疫分析、酶联免疫分析及免疫层析等方法。放射免疫分析和酶联免疫分析法需要昂贵的设备、专业的操作人员和复杂的操作步骤，难以快速得到检测结果。免疫层析法因具有操作简单、快速及成本底等特点，而常用于快速定性或半定量检测。

免疫层析技术是出现于80年代初期的一种独特的免疫分析方式，它通常以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，并同时使样品中的待测物与层析材料上针对待测物受体（如抗体或抗原）发生高特异、高亲和性的免疫反应。免疫层析技术常见的示踪粒子有胶体金、乳胶、胶体硒、明胶等，其中运用最成功的标记物为胶体金，例如已出现检测盐酸克伦特罗、乙肝表面抗原、黄曲霉毒素和促黄体激素等的胶体金试纸条。

然而胶体金免疫层析技术检测灵敏度较低，在实际检测中只能对检测物进行定性或半定量，无法准确定量。目前，已有相关专利报道了以荧光纳米微粒为标记物进行免疫层析检测，如公开号为CN1645146A的专利公开了一种用荧光稀土纳米颗粒作为标记物的免疫层析方法及其检测试纸条的制备；公开号为CN1866012A的专利公开了一种定量、快速的免疫检测方法及其专用装置，该方法将荧光物质螯合物Eu³⁺、SrTi³⁺、Tb³⁺、Dy³⁺与有机高分子纳米微粒结合，制备成荧光微粒，通过荧光检测来进行定量，但是这些纳米荧光微球都是在紫外光源下激发，紫外光源的设置增加了检测仪器的成本。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种粒径稳定、光谱适用于可见发射光的纳米荧光微球，采用该纳米荧光微球作为标记物的免疫层析方法，简便快速、灵敏度高且可进行定量检测。

本发明同时还要提供一种纳米荧光微球的制备方法，该方法可获得粒径稳定、光谱适用于可见发射光的纳米荧光微球，并且该方法简单。

为解决上述技术问题，本发明采用的一种技术方案是：

一种纳米荧光微球，具有核壳结构，该纳米荧光微球的粒径为200~500nm，其内核为包含有荧光分子的聚合物微球，外壳具有修饰在所述聚合物微球外表面上的一种或多种官能团，该所述官能团能够直接与配体或生物大分子反应形成微球表面的共价键连接，或在激活后与配体或者生物大分子进行共价标记；所述的聚合物微球为聚甲基丙烯酸甲酯的微球或甲基丙烯酸甲酯与其它单体共聚形成的共聚物的微球或者它们的混合物，其中甲基丙烯酸甲酯单元的重量至少占所述纳米荧光微球总重量的50%，所述的荧光分子的重量占所占纳米荧光微球总重量的0.05%~5%。

根据本发明，所述甲基丙烯酸甲酯与其它单体共聚形成的共聚物中，甲基丙烯酸甲酯与所述其它单体的结构单元数均大于等于50。所述的其它单体为包括但不限于氟乙烯、氯乙烯、溴乙烯、乙烯碘化、苯乙烯以及丙烯酸等。

根据本发明，所述的官能团可以为选自羧基，乙醇胺基，羟基，胺基，氨基，亚胺基，环氧基，异氰酸酯基，金属醇盐，及聚乙二醇基中的一种，其中优选为羧基。

根据本发明，所述荧光分子指在适当的激发波长下可发射荧光的物质。本发明中，荧光分子优选为荧光素及其衍生物、罗丹明、肾上腺素染料、氟硼莹等。其中，更优选采用罗丹明例如罗丹明 Red-X和罗丹明 6G等作为荧光分子。荧光分子的重量优选为所述纳米荧光微球总重量的0.2%~5%。

优选地，本发明的纳米荧光微球的粒径为350~400nm，更优选为370~390nm。