[发明专利]一种蘑菇菌种的保藏方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种食物菌种的保藏方法，具体涉及的是一种蘑菇菌种的保藏方法。

背景技术

菌种作为一种重要的生物资源，为了保持其优良性状不变，应当及时对其进行保藏，目前食物菌菌种保藏方法主要有液氮低温保藏法、斜面定期移植法、液体石蜡法、砂土管保藏法以及自然基质宝藏法等，其中液氮低温保藏法是目前比较种先进的一种方法，但费用较高，国外保藏机构多采用此法；在我国，目前生产或研究中所食用菌菌种仍然主要采用试管或瓶保藏法，主要缺点有：保存时间短，菌种稳定性不好，易发生变异或退化，成本高，携带不方便等缺点。

蘑菇含水量高，组织非常细嫩，菌盖表面没有明显的保护结构，常温下采1～2天，菇体内的水分就会大量蒸发散失，菌盖开始破膜、开伞、萎缩、褐变，甚至腐烂，菌柄伸长，商商品价值下降甚至消失，而蘑菇菌种采用试管或瓶保藏法以及液体石蜡法、砂土管保藏法保藏时，根据其蘑菇菌育种的规律，品种更新的周期约3-5年，期间无须转管或只转管一次是合适的，保藏期太长反而意义不大。保藏期太短则由于频繁扰动和温度、光照变化，时常出现操作污染和菌种退化，菌种稳定性不好，携带不方便。

发明内容

针对现有技术上存在的不足，本发明目的是在于提供一种适用范围广、保藏期长、成本低，成活率高以及方便携带和稳定可靠的蘑菇菌种保藏方法。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：

本发明的一种蘑菇菌种保藏方法，其特征在于，其保藏方法包括如下步骤：

（1）培养基配制；其包括小麦提取液20-30%，木粉30-40%，酵母提取液1.5-3%，蔗糖0.8-2%，乳糖1.2-2.6%，缓冲剂0.5-1%,氯化钙0.6-1%，硫酸镁0.8-1.5%，琼脂1%-2%，料水30-70%，PH6.1-7.0，制成无菌平皿，待培养基凝固时，在培养基表面铺设一层在培养基表面铺设一层多孔纸；

（2）加大填料量减少与空气接触面；待培养基冷却至22-24℃时，将蘑菇菌种接种至载体上，在22℃无菌培养箱内培养100小时，然后将载体连同菌种一并取下，并按照试管底部大小剪切至相应大小放置在试管中，稍压实，加棉塞，在通过高压蒸汽128℃灭菌40-50分钟，连容器搬入无菌室；

(3)真空冷冻干燥；将步骤（2）中装入菌种的载体试管放入冷冻干燥机，将温速度为每分钟3℃，冷却至-40℃，恒温预冻2小时，然后开启真空泵，在20分钟内真空度达到22帕后，以每25分钟隔板温度升高5℃，真空度降低6帕，待隔板温度升高25℃，真空降到0.5帕，样品升高为25℃；

（4）置换管塞；接种时将用升汞溶液消毒的高密度聚苯乙烯泡塑试管置换棉塞；

（5）包装与温度控制；用保险袋和保险盒双重保护菌种，置于5±1℃恒温冰箱冷藏，使菌种不易失活。

根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述缓冲剂为硫酸钙或碳酸钙。

根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液20%，木粉31%，酵母提取液2%，蔗糖0.8%，乳糖2%，缓冲剂0.5%,氯化钙0.7%，硫酸镁1.2%，琼脂1.2%，料水41%，PH为6.8。

根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液25%，木粉30%，酵母提取液1.6%，蔗糖1%，乳糖1.5%，缓冲剂0.8%,氯化钙0.7%，硫酸镁1.3%，琼脂1.9%，料水44%，PH为6.5。

根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述培养基配制的组成配方包括小麦提取液30%，木粉15%，酵母提取液2.8%，蔗糖1.2%，乳糖2.5%，缓冲剂0.6%,氯化钙0.9%，硫酸镁1%，琼脂1.2%，料水37%，PH为6.7。

根据上述的一种蘑菇菌种保藏方法，其中，上述料水比为1:1.

本发明通过对蘑菇菌种进行引导驯化，以提高低温耐冻性、耐负压行及复水成活率等性能，然后制备冷冻管进行保存，确保长入内部的菌丝可长期存活；并通过木粉填充空隙一方面可增加木质类养分，另一方面减慢水分的散失，而且与空气接触面只有试管内径大小，加上特制试管塞，可保持培养基3年失水率小于30%，具有成本低廉、操作简单、稳定可靠，保藏期长、成活率高和适用范围广的优点，值得推广使用。

  具体实施方式

为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。

实施例1：