[发明专利]一种应用纳米磁珠提取食用油脂中核酸的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种应用纳米磁珠提取食用油脂类核酸的试剂盒。

背景技术

核酸的提取与纯化技术是生物化学与分子生物学的一项基本技术。随着分子生物学技术广泛应用于生物学，医学，食品检测及其相关领域，核酸的提取与纯化技术也得到了进一步的发展。

日前常采用的核酸提取技术大体上可以分为液-液提取和固相提取两种方法。其中液-液提取法发展的较早，使用比较广泛，主要原理是基于DNA在不同溶剂中溶解行为不同来达到分离纯化DNA目的，其优点在于提取DNA产率较高，成本低廉，主要缺点是费时费力，提取DNA纯度不高，大量使用有毒溶剂，难以实现自动操作。固相萃取法发展较晚，其主要原理是将DNA在一定条件下吸附到固体表面(通常为硅胶、离子交换、膜介质)，除去其它不吸附的杂质后，再将DNA从固相表面洗脱下来。目前大多数核酸提取试剂盒都是基于固相萃取技术。固相提取法克服了以往液-液提取法的缺点，大大提高了提取效率，虽然提取产率稍逊于液-液提取法，但是纯度较高，而且不含有液-液提取中常出现的酚和表面活性剂等杂质，因而更适合后续分子生物学检测，但是固相分离时往往需要通过离心或抽滤等手段来进行试剂体系的交换与核酸的同收，不太适用于自动化平台。另外，固相介质价格昂贵，会使检测成本有所提高。

纳米磁珠法提取核酸是近儿年才发展起来的核酸提取方法。其主要原理是在磁珠(主要为铁氧体)表面通过共聚合和表面修饰等引入活性基团，这些活性基团有-COOH，-NH2，-OH，-COH，-SH，-SO3等，利用磁珠表面的这些活性基团，以共价键的形式偶联在磁珠的表面，制备成具有磁性的亲和吸附剂，然斤与生物样品共同孵育后，目标分子能够迅速被磁珠捕获，可以在磁场作用下从液相中沉降下来，经过简单的洗涤，分离得到表面结合有目标分子的磁珠复合物，通过改变洗涤条件可以将目标分子从磁珠上洗脱下来。其提取过程中不需要苯酚和氯仿等毒性大的有机溶剂，提取的基因组DNA纯度高、产量高，提取步骤简单，不需要离心，不仅可以满足从小亮到大量不同提取规模的要求，还能选择手动和自动化操作，使分离技术取得了巨大的进步。

到目前为止，保存较好的生物材料、加工或部分深加工生物材料基本均可利用一种或多种核酸提取技术提取到适量的核酸进行后续的分子生物学操作，但对于某些特殊的实验材料(如食用油脂等)，目前常用的核酸提取方法却难以提取到供后续检测的核酸。多年来，国内外诸多实验室均尝试建立稳定可靠的食用油脂中核酸的提取方法，专利号200810029117.7的专利公开了“一种提取食用油脂中核酸的方法”，利用传统的CTAB法，配合自制的长片段核酸富集纯化装置，从食用油脂中提取到了适量的核酸供后续PCR检测，但该方法仍然使用了苯酚、氯仿等有机溶剂，对人身体有害，操作过程复杂，并且需要使用特殊的富集装置，方法的可操作性不强，不利于推广使用。

因此，市场上需要开发一些操作简单、稳定可靠、成本低、产量高的油脂类DNA提取试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于提供一种食用油脂类DNA提取试剂盒，该试剂盒制备过程简单可靠、成本低、产品质量稳定，适用于各类食用油脂样品的DNA提取。包括：裂解液、沉淀液、共沉剂、结合液、磁珠缓冲液、洗涤缓冲液I、洗涤缓冲液II、洗脱缓冲液。

所述的裂解液含有10mmol/L Tris-HCl，150mmol/L NaCl，20mmol/L EDTA，2％十二烷基磺酸钠(SDS)，该裂解液的pH值为8.0。

所述的沉淀液含有5g/L CTAB，40mmol/L NaCl。

所述的共沉剂为1g/ml的糖元。

所述的磁珠缓冲液中的磁珠由内核层由磁性Fe₃O₄颗粒构成，内核层外包被了四乙氧基硅烷(TEOS)。

所述的洗涤缓冲液I含有10mmol/L Tris-HCl，150mmol/L NaCl，20mol/L EDTA，该洗涤缓冲液PH值为6.0。

所述的洗涤缓冲液II含有70％的无水乙醇。

所述的洗脱缓冲液含有10mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA，该缓冲液的PH值为8.0。

本发明提供一种磁珠制备方法。包括：纳米Fe₃O₄磁珠的制备；磁珠表面四乙氧基硅烷修饰。

本发明还提供了一种根据权利要求1所述的试剂盒提取油脂中核酸的方法，步骤如下：油脂中极性成分的萃取；使用裂解液释放核酸；磁珠特异性吸附核酸；洗涤去除杂质；洗脱得到核酸溶液。