[发明专利]一种高效表达重组角质细胞生长因子-1及其类似物的生产方法

说明书

技术领域

本发明属于蛋白质工程领域，涉及优化人角质细胞生长因子-1(简称FGF7或KGF1)的昆虫细胞表达密码子，以及用于表达和纯化rhKGF1的生产方法。 

背景技术

角质细胞生长因子-1(KGF1)，即FGF7，是FGFs家族的成员之一，最初于1989年由Rubin等从人胚胎肺成纤维细胞生长的条件培养液中分离出来(Finch PW，Rubin JS，Miki T，Ron D，Aaronson SA.Human KGF is FGF-related with properties of a paracrine effector of epithelial cell growth.Science.1989，245(4919)：752-5)，可促进上皮细胞的增殖与分化，是迄今发现对皮肤角质形成细胞最有效的促细胞分裂因子(Marchese C，Rubin J，Ron D，Faggioni A，Torrisi MR，Messina A，Frati L，Aaronson SA.Human keratinocyte growth factor activity on proliferation and differentiation of human keratinocytes：differentiation response distinguishes KGF from EGF family.J Cell Physiol.1990，144(2)：326-32.)。由于KGF1对多种组织的上皮细胞，如肺泡上皮细胞，肝实质细胞，胃肠细胞，尿道上皮细胞和各种鳞状上皮的角化细胞等具有促增殖作用，因此对皮肤、角膜、膀肤、肾、肺、肠、肝等部位上皮组织的损伤具有重要的修复作用，因而KGF在皮肤创伤愈合，角膜损伤修复，肝、肺、肠等器官的上皮损伤修复和辐射防护等方面具有潜在的临床应用前景。 

目前，美国Amgen公司研发的静脉注射液Kepivance(含重组hKGF)于2004年12月获美国FDA批准上市，用于治疗正在进行放化疗以准备骨髓移植的恶性血液病患者的口腔粘膜炎，减少患病几率或缩短发病时间(Blijlevens N.，Sonis S..Palifermin(recombinant keratinocyte growth factor-1)：a pleiotropic growth factor with multiple biological activities in preventing chemotherapy-and radio therapy-induced mucositis.Annals of Oncology，2007，8：817-826；Spencer W.Redding，D.D.S.，M.Ed..Cancer Therapy-Related Oral Mucositis.Cell Metab，Journal of Dental Education，2005，919-929.)，售价高达每支1.5万元。价格昂贵的原因之一是，重组KGF1的低表达，Ron等为了提高重组hKGF的表达量，把hKGF信号肽的31个氨基酸中的前30个氨基酸去掉，KGF的表达量也只有全菌蛋白的1％～2％，大约相当于20～40mg/L(Ron D，Bottaro DP，Finch PW，Morris D，Rubin JS，Aaronson SA.Expression of biologically active recombinant keratinocyte growth factor.Structure/function analysis of amino-terminal truncation mutants.J Biol  Chem.1993，268(4)：2984-8.)。