[发明专利]具有体外肿瘤靶向作用的经叶酸配体修饰的氧化铁纳米颗粒与其制备方法及体外评价方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种氧化铁纳米颗粒的制备方法，具体地说是具有体外肿瘤靶向作用的经叶酸配体修饰的氧化铁纳米颗粒与其制备方法及体外评价方法。

背景技术

我国每年大约有250万名新增癌症病人，其中大多数在确诊时，已进入癌症中晚期。如果要实现对肿瘤的有效治疗，重要的一点是能通过各种技术来实现肿瘤的早期诊断。因此，检查技术优劣直接关系到癌症治疗效果的好坏。

肿瘤纳米技术与纳米药物研究刚刚起步，需要利用纳米技术、生物学、化学、物理、医学、药学和公共卫生等领域的知识和研究手段。纳米药物既是国际科学前沿，也是与人类健康和生活密切相关的重要社会问题，充满了创新的机遇。

随着纳米研究的深入和人们对纳米控制能力的提高，纳米技术为工程科技研究和技术变革带来了激动人心的机会。就医药科学而言，纳米技术有望在癌症、心血管病、糖尿病、脊髓损伤等的药物治疗等领域取得突破。纳米技术将对生物医学研究中产生新的变革，并将为疾病的预防、检测、早期诊断和治疗提供新的方法和药物。纳米药物全新的治疗机理将有可能从观念上改变人类疾病预防和治疗的模式和途径，是取得纳米药物研究突破的关键，但是难度也更大。

纳米科学的快速进步，为生物医药的发展带来了新的机遇。如何通过发展和利用纳米技术去预防、检测、早期诊断和治疗人类疾病，如何确保纳米药物的安全性是摆在各国科学家面前的极富挑战的课题。

癌症是21世纪最具挑战性的医学问题之一。尽管为攻克癌症，中外科学家进行了数十年的不懈努力，但至今绝大多数的癌症的预防、早期诊断和治疗仍不尽如人意。世界范围内癌症的死亡率居高不下，成为人类主要健康“杀手”。纳米技术为肿瘤的早期诊断和治疗提供了新的思路和方法。科学发现，人类的一些恶性肿瘤细胞具有对于叶酸受体的高表达。如果能制备一种具有叶酸配体修饰的靶向试剂或药物就能很好地检测和治疗癌症。

虽然很多专利可能都提到了如何制备四氧化三铁氧化铁纳米颗粒等，但是制备葡聚糖-氧化铁纳米粒或叶酸-葡聚糖-氧化铁纳米粒的方法由于制备工艺本身就具有经验性的特点，而且，各专利发明人或者厂家对于工艺细节的刻意保密，公开提供的信息有限，使得许多文献中提到的许多制备方法和实验方案难以重复实施，或者即使能够重复实施，所制得的纳米颗粒或其悬液等状态也不稳定。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术现状，而提供核心是氧化铁，其外壳主要为叶酸的氧化铁纳米颗粒，能有效识别肿瘤细胞的具有体外肿瘤靶向作用的经叶酸配体修饰的氧化铁纳米颗粒与其制备方法及一种体外评价方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：

具有体外肿瘤靶向作用的经叶酸配体修饰的氧化铁纳米颗粒，其中，氧化铁纳米颗粒以氧化铁为内核，该氧化铁纳米颗粒的表面以叶酸进行共价修饰。

为优化上述技术方案，采取的措施还包括：

氧化铁纳米颗粒的表面吸附有活性剂粒子，所述的活性剂粒子为葡聚糖分子；该氧化铁纳米颗粒为叶酸-葡聚糖-氧化铁纳米粒。

制备经叶酸配体修饰的氧化铁纳米颗粒的方法，其中，包括以下步骤：

步骤1、合成Fe₃O₄粒子悬浮液；

步骤2、将以去离子水为载液的葡聚糖溶液与Fe₃O₄粒子悬浮液混合后加热、回流，冷却后透析，离心过滤，得稳定的葡聚糖-氧化铁纳米粒悬浮液；

步骤3、取步骤2制备的葡聚糖-氧化铁纳米粒悬浮液，加入一半体积的无水乙醇，离心处理，倾去上清液，取沉淀物，并将沉淀物分别用无水乙醇、二甲亚砜清洗，再经无水二甲亚砜超声分散，得葡聚糖-氧化铁纳米粒的无水二甲亚砜溶液；

步骤4、将无水二甲亚砜加至叶酸溶液并搅拌使其充分溶解后，再加入二环己基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺及三乙胺溶液，避光，充氮，待混合液反应后，过滤出去沉淀物，将过滤后溶液加入含丙酮的乙醚溶液中，充分搅拌，滤去溶液，将余物真空干燥即得叶酸活性酯；

步骤5、将叶酸活性酯加入葡聚糖-氧化铁纳米粒的无水二甲亚砜溶液，使叶酸活性酯溶解，充氮，避光，加热，并加入三乙胺作为催化剂，待溶液停止反应后，对溶液进行磁性分离，并对分离物分别用无水乙醇和蒸馏水清洗，真空干燥，即得叶酸-葡聚糖-氧化铁纳米粒。