[发明专利]一种短小芽孢杆菌、益生菌制剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一种具高酶活性和抑弧菌活性的短小芽孢杆菌，及利用其作为活性成份的益生菌制剂及其制备方法和应用。

背景技术：

随着规模化、集约化水产养殖业的迅速发展，水产养殖病害频繁发生，为了控制疾病，一些抗生素药物在水产养殖中被广泛使用和滥用，不仅造成环境中药物残留、细菌耐药性增加，而且由于水体环境的流动性，耐药基因更容易水平转移，造成更多耐药株的出现。为了应对耐药性，养殖中不得不加大用量并不断更换药物种类，进而造成恶性循环。另一方面药物的大量使用，药物在水产动物体内残留造成的食品安全问题也日益引起关注。为了应对这些问题，采用替代的生物防治措施成为当前水产养殖的热点，其中益生菌的应用在水产养殖中越来越受到重视，它们不仅具有抑制细菌性病原的作用，还具有促进水产养殖动物生长、改善免疫等作用。

市场上水产用益生菌产品，名目繁多，层出无穷，但是概括起来存在以下问题：(1)绝大多数产品的益生菌直接来源于人类和陆生动物的益生菌种类。这些陆源益生菌是否能长期存活于水体环境或水生动物的肠道则几乎无相关的报道。Panigrahi等(2004)则直接认为那些借鉴畜禽思路所研制的水产益生菌存在难定植的不足，不能在水产动物消化道内存留并大量繁殖。(2)水产益生菌产品以水质调节剂为主，饲用添加剂为次要。一些益生菌产品标示其既可作水质调节剂也可作为饲用添加剂，显然违背了微生物生长环境存在差异的规律。(3)作为饲用添加剂的益生菌产品以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌为常见，少见其它类型的芽孢杆菌，而上述三种芽孢杆菌并非海洋环境的常见菌群。(4)水产益生菌产品中菌株的酶活效果不明确、抑菌效果不明确，而这二项指标是评价饲用益生菌的效果的核心指标。以当前水产益生菌使用最多的芽孢杆菌为例，目前已经报道的芽孢杆菌抗菌素有169种，这些抗菌素主要是肽类，多作用于革兰氏阳性细菌。人和陆生动物的肠道主要病原菌是革兰氏阳性细菌，因此对于人和陆生动物而言，芽孢杆菌是比较合适的益生菌。但是对于海洋水产动物而言，主要的病原菌是革兰氏阴性菌，如弧菌。芽孢杆菌对于这些来自水产动物的革兰氏阴性菌的抑制效果还少见报道。因此不可照搬挪用，需要针对水产动物的特点筛选对弧菌等革兰氏阴性菌有抑制效果的芽孢杆菌等。结合上述问题，我们迫切需要从水产动物生长的土著环境和肠道中分离益生菌株，并且以酶活性和抑菌活性作为筛选和评价效果的主要指标。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一种分离自健康凡纳滨对虾肠壁粘膜且具有高酶活性和抑弧菌活性的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)LV149，该菌于2011年11月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号：CCTCC NO：M2011411。

本发明所述的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)LV149分离自健康凡纳滨对虾肠壁粘膜。

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)LV149的生物学特征如下：

1、菌落形态和细胞形态特征：菌株在LB琼脂培养基和2216E培养基上的菌落形态为：乳白色、扁平、表面较湿、不透明、褶皱、边缘不整齐，培养24小时菌落直径2-4mm。杆状，芽孢椭圆形，中性或偏端生。

2、生理生化特征：

菌株生长适宜盐度范围：5-35‰，7％以上NaCl不生长，生长适宜pH范围为5-9。

革兰氏阳性，接触酶(-)，氧化酶(+)，V-P试验(-)，硝酸盐还原(-)，淀粉水解(+)，明胶液化(+)，能发酵D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-甘露醇、D-葡萄糖，发酵葡萄糖不产气，苯丙氨酸脱氨酶(-)，柠檬酸盐利用(+)，卵磷脂酶(-)，吲哚试验(-)，酪素水解(+)，酪氨酸水解(-)。