[发明专利]肠道病毒71型cDNA感染性克隆、其构建方法及应用无效
| 申请号： | 201210028906.5 | 申请日： | 2012-02-09 |
| 公开（公告）号： | CN102604969A | 公开（公告）日： | 2012-07-25 |
| 发明（设计）人： | 张永欣;岑山;金奇 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医药生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/41 | 分类号： | C12N15/41;C07K14/085;C12N15/10;C12N15/63;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/85;C12N7/00;A61K48/00;A61P31/14;C12Q1/70 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞;王加岭 |
| 地址： | 100051 北京市宣武区南*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肠道病毒 71 cdna 感染性 克隆 构建 方法 应用 | ||
1.一种肠道病毒71型cDNA感染性克隆，其是通过反向遗传操作获得的肠道病毒71型SZ98 pro株的cDNA感染性克隆。
2.根据权利要求1所述的肠道病毒71型cDNA感染性克隆，其编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的肠道病毒71型cDNA感染性克隆，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
4.一种构建权利要求1-3任一项所述肠道病毒71型cDNA感染性克隆的方法，其是以肠道病毒71型SZ98 pro株的基因组为模板，通过RT-PCR得到全长cDNA克隆。
5.含有权利要求1-3任一项所述肠道病毒71型cDNA感染性克隆的载体。
6.根据权利要求5所述的载体，其特征在于，出发载体为pBR322。
7.含有权利要求6所述载体的宿主细胞。
8.根据权利要求7所述的宿主细胞，其为SZ98 pro/pBR322/DH5α，保藏号CGMCC No.5659。
9.制备肠道病毒71型SZ98 pro株的拯救病毒的方法，其特征在于，首先对肠道病毒71型SZ98 pro株进行了全基因组测序，根据测序结果设计用于构建cDNA克隆的引物和酶切位点，通过引物在基因组cDNA的5’端引入T7启动子，在其3’端引入polyA尾，然后以肠道病毒71型SZ98 pro株的基因组为模板，进行RT-PCR反应，得到全长cDNA克隆，酶切线性化后进行体外转录，用体外转录出的RNA转染vero细胞，获得拯救病毒。
10.权利要求1-3任一项所述肠道病毒71型cDNA感染性克隆在制备抗EV71病毒药物及疫苗中的应用。
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