[发明专利]一种测定过氧化氢含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定过氧化氢含量的分析方法，特别是一种四羧基铁酞菁催化氧化罗丹明B荧光猝灭法测定过氧化氢含量的方法。

背景技术

过氧化氢是一种常用的化学试剂，可作为消毒剂、杀菌剂、脱氧剂、漂白剂、聚合反应的引发剂等。近年来，过氧化氢在自然界也广泛存在，且是酸雨形成的重要原因之一，因此测定过氧化氢对于环境监测和临床分析具有很重要的意义。目前，测定过氧化氢的方法主要有滴定法、分光光度法、电化学法、化学发光法、色谱法、共振散射光谱法、荧光光度法、原子吸收光谱法等。其中利用酶催化体系测定H₂O₂具有灵敏度高，检出限低的优点，常需要使用过氧化物酶——辣根过氧化物酶(HRP)。然而HRP不但价格较高，且易失活变性而不易保存，为了保持它的活性，实验条件和储存环境都很苛刻。因此，为了克服HRP的这些不足，人们开始研究用其模拟酶来替代HRP。目前已见报道的过氧化物模拟酶主要是金属卟啉类化合物及氯化血红素、血红蛋白等。金属酞菁类化合物的结构与卟啉极其相似，也具有过氧化物模拟酶的性质，且该类化合物具有良好的光、热稳定性，易于合成，作为过氧化物模拟酶具有很大发展前景。四羧基铁酞菁(FeC4Pc)可作为一种过氧化物模拟酶，但目前应用四羧基铁酞菁催化氧化罗丹明B荧光猝灭法测定过氧化氢含量的方法尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种四羧基铁酞菁催化氧化罗丹明B荧光猝灭法测定过氧化氢含量的方法。

具体步骤为：

(1)于10支5.0mL比色管中依次加入0.0、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、1.3、1.4、1.5mL 0.5～2.5×10^-5mol/L的H₂O₂，再在每个比色管中分别加入0.1～0.6mL 3.5～6.5×10^-6mol/L的罗丹明B溶液、0.3～1.5mL 0.5～2.0×10^-4mol/L的四羧基铁酞菁，以不加H₂O₂为试剂空白；

(2)将步骤(1)所得的10支比色管中的溶液均用超纯水稀释至5.0mL刻度，摇匀，反应70～90min，然后在荧光光度计上用1cm石英比色皿，设置激发波长为554nm，发射波长为575nm，激发和发射狭缝均为5nm，电压为600V，分别测定加有H₂O₂的溶液的荧光值F和不加H₂O₂的试剂空白的荧光值F0，计算差值ΔF＝F₀-F，过氧化氢浓度在6.48×10^-8mol/L～4.86×10^-6mol/L范围内与575nm波长的荧光降低值ΔF成线性关系，其回归方程为ΔF＝8.646×10⁷c+14.30，相关系数0.9992，检出限5.44×10^-8mol/L；

(3)另取雨水0.5～2.0mL，用上述方法测定其荧光值，计算出雨水中过氧化氢的含量。

本发明反应的原理：四羧基铁酞菁(FeC₄Pc)作为过氧化物模拟酶，催化过氧化氢反应产生羟自由基，羟自由基使罗丹明B发生荧光猝灭反应。

本发明测定方法灵敏度高、选择性好、简便。

附图说明

图1为实施例空白与1.62×10^-6mol/L过氧化氢的荧光光谱图。

具体实施方式

实施例：

(1)于10支5.0mL比色管中依次加入0.0、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、1.3、1.4、1.5mL1.624×10^-5mol/L的H₂O₂，再在每个比色管中分别加入0.4mL5×10^-6mol/L的罗丹明B溶液、0.9mL 1.0×10^-4mol/L的四羧基铁酞菁，以不加H2O2为试剂空白；