[发明专利]一种体外培养牛胚胎的培养基

说明书

技术领域

    本发明涉及体外培养牛胚胎的技术领域，具体为一种体外培养牛胚胎的培养基。

背景技术

现有的体外培养牛胚胎的培养基，其一般选取含有牛血清白蛋白（BSA）的CR1aa培养基，但是现有的培养基在体外培养牛胚胎时，其总囊胚发育率和高质量囊胚(C1囊胚，IETS标准)的总数并不高，为此，研究人员进行了大量的实验，具体实验数据见图1，其证实柠檬酸钠和BSA对牛体外受精胚胎的体外发育有有益的影响，同时也确定在BSA和血清中含有的不同的胚胎营养素因子，可能不是柠檬酸钠，对促进牛桑椹胚和囊胚发育，故发现这种胚胎营养素因子对于体外培养牛胚胎的培养基的成分至关重要。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种体外培养牛胚胎的培养基，其加入了一种新的胚胎营养素因子，使得在该培养基中培养的牛体外胚胎的总囊胚发育率高，且高质量囊胚的总数提高。

一种体外培养牛胚胎的培养基，其技术方案是这样的：

其特征在于：培养基中额外加入二价镁离子。

其进一步特征在于：

当二价镁离子的含量为0.35mM～2.1mM时，培养基可提高高质量牛胚胎的数量和质量；

当二价镁离子的含量为1.4mM～2.8mM时，培养基可提高牛胚胎中的雌性比。

其更进一步特征在于：

所述二价镁离子的来源具体为硫酸镁化合物或氯化镁化合物中的二价镁离子；

牛胚胎的所述培养基适合与培养所有牛品种，印系牛（Bos Indicus）、 欧系牛（Bos Taurus）、以及杂交品系，包括奶牛、肉牛、黄牛、婆罗门牛；

所述牛胚胎包括体内胚胎、体外胚胎、孤雌活化胚胎、克隆胚胎、品种杂交的胚胎；

所述培养基适合于培养所有牛的胚胎，包括新鲜胚胎、慢速冷冻胚胎、玻璃化冷冻胚胎；

所述体外培养牛胚胎的培养基适合于培养所有牛的胚胎，包括从一细胞开始到胚胎着床前后的囊胚期。

采用本发明的结构后，在现有技术的体外培养牛胚胎的培养基中加入二价镁离子后，从数据图表可知，相对于未加入二价镁离子的培养基，其使得在该培养基中培养的牛体外胚胎的总囊胚发育率高，且高质量囊胚的总数提高。

附图说明

图1为现有技术的培养基中BSA、柠檬酸钠和FBS对体外培养牛胚胎发育的影响效果数据表格；

图2为在培养基中加入二价镁离子从0到2.1mM对体外培养牛胚胎发育的影响效果数据表格；

图3为基础培养基中添加镁离子浓度为1.4mM时对体外培养牛胚胎发育的影响效果数据表格；

图4为基础培养基中添加二价镁离子来源分别为硫酸镁化合物或氯化镁化合物时对体外培养牛胚胎发育的影响效果数据表格；

图5为在培养基中加入二价镁离子从0到5.6mM对体外培养牛胚胎发育性别的影响效果数据表格。

具体实施方式

    实验一：含有二价镁离子的培养基对体细胞共培养的IVF胚胎的影响

如图2所示，将加入了BSA的无血清CR1aa培养基分为A-E五组体外培养牛胚胎，其中A组不加入二价镁离子，B、C、D、E组加入0.35mM、0.70 mM、1.4 mM、2.1 mM的二价镁离子，A-E五组的表明活性剂均为6 mg/ml的ICPbio BSA，在相同的其余环境下，分别重复四次，取得实验数据，图2说明在培养基中加入二价镁离子从0.35mM到2.1mM，胚胎培养的质量从桑葚期开始有显著的提高，且1.4mM的浓度下培养的相对0.35mM浓度下培养的胚胎数量和质量要显著提高。

实验二：培养基添加镁离子浓度为0或1.4mM时对体外培养牛胚胎发育的影响

如图3所示，将无血清CR1aa培养基分为A-F六组体外培养牛胚胎，其中A组不加入镁离子且表明活性剂为ICPbio BSA、B组加入1.4mM的氯化镁化合物且表明活性剂为ICPbio BSA、C组不加入镁离子且表明活性剂为Sigma BSA、D组不加入镁离子且表明活性剂为PVA、E组加入1.4mM的氯化镁化合物且表明活性剂为PVA、F组不加入镁离子且表明活性剂为FBS，在相同的其余环境下，分别重复四次，取得实验数据，图3说明在基础培养基中添加镁离子浓度为1.4mM时，可显著的提高高质量牛胚胎的数量（这些高质量的胚胎是指适合冷冻保存和胚胎移植的），并且和添加小牛胎血清（FBS）的效果相当。