[发明专利]AFP表位肽和IL-15协同表达的免疫基因治疗质粒

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及AFP表位肽和IL-15协同表达的免疫基因治疗质粒和应用。

背景技术

基因治疗是近十几年来随着现代分子生物学技术的发展而诞生的新的生物医学治疗技术。基因治疗是通过特定载体将具有治疗作用的基因导入细胞的治疗方法。基因治疗载体包括病毒载体和非病毒载体。质粒载体是非病毒载体的一种，具有制备简单，易储存，安全的特点。

细胞因子免疫基因治疗是基因治疗的重要策略之一，在肿瘤治疗的研究中受到广泛重视。细胞因子基因转导可对肿瘤微环境产生影响，比单纯给予外源性细胞因子治疗的不良反应小，并可以在细胞局部持续性表达高浓度的细胞因子，刺激或增强机体的特异性抗肿瘤免疫反应，使肿瘤生长受到抑制，达到肿瘤治疗的目的。多种细胞因子，包括IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-6，IL-7，IL-10，IL-12，IL-15，IL-18，IL-21，IL-24，IL-27，IFN，TNFα等都已应用于肿瘤治疗的临床前实验研究，其中IL-2，IL-12，IL-21，IFN，TNFα等已进行了临床试验研究。动物实验结果表明多种细胞因子可以增强抗肿瘤免疫反应而抑制肿瘤生长。细胞因子在细胞内合成，通过信号肽引导分泌到细胞外，在此过程中其信号肽在细胞内被降解。研究表明细胞信号肽的部分序列被置换后可不影响其功能；同时，信号肽中如果含有合适的能与组织相容抗原(MHC)结合的表位肽，该表位肽可被MHC递呈。

甲胎蛋白(alpha-fetoprotien，AFP)是原发性肝癌的肿瘤标志物，约有50％的肝癌患者的肿瘤细胞表达AFP。研究表明AFP含有多个MHC I型限制性抗原表位，可激活细胞毒性T细胞。AFP_158-166表位肽是其中之一，其可刺激从健康志愿者外周血分离的T细胞产生免疫应答。

发明内容

本发明的目的是提供一种AFP表位肽和IL-15协同表达的免疫基因治疗质粒。

本发明的第二个目的是提供AFP表位肽和IL-15协同表达的免疫基因治疗质粒的用途。

本发明的技术方案概述如下：

AFP表位肽和IL-15协同表达的免疫基因治疗质粒，它是序列表SEQ ID NO.1所示的序列。

所述质粒的结构是在真核表达载体上有HIV2启动子、AFP_158-166表位修饰的信号肽片段、白细胞介素-15编码序列、CMV启动子和TAT基因。

AFP表位肽和IL-15协同表达的免疫基因治疗质粒在制备人肿瘤免疫基因治疗药物的应用。

本发明的优点和有益效果：

本发明以AFP158-166表位肽作为治疗靶点，通过将编码AFP_158-166表位肽的基因序列插入IL-15信号肽并取代部分序列，实现AFP_158-166表位肽在IL-15信号肽中的表达。当本发明的质粒载体转染入细胞后，在IL-15分泌的同时，AFP_158-166表位肽可被细胞表面的MHC I型分子递呈，诱导AFP特异性的免疫反应。

附图说明

图1是本发明所构建的质粒载体pHi2-afpIL15-CMV-TAT的结构示意图。

具体实施方式

本发明以细胞因子IL-15作为治疗基因，IL-15是一个多功能的细胞因子，对天然免疫和获得性免疫反应都有重要的调节作用。IL-15可以促进中性粒细胞、巨噬细胞的活性，对树突状细胞的功能起关键作用。另外，IL-15促进淋巴效应细胞，尤其是NK细胞、NKT细胞和CD8⁺T细胞的产生、激活、归巢和存活。IL-15可以抑制IL-2诱导激活引起的细胞死亡。IL-15对记忆性T细胞的存活和增值起关键作用，其可以调节记忆性T细胞的稳态增值，维持其数量。因此，IL-15被认为是非常有潜力的可用于免疫治疗的细胞因子。实验证明应用IL-15可以促进过继性转移的肿瘤特异性T细胞的存活并增强对肿瘤的排斥，通过基因工程方法表达IL-15的肿瘤细胞在体内生长缓慢、转移能力下降。最新资料证明IL-15可以使处于免疫耐受状态的CD8⁺T细胞重新增值并恢复免疫功能。发明中所用IL-15基因购自Invitrogen。