[发明专利]一种从红藻角叉菜中提取化合物的提取方法

说明书

 

技术领域

本发明涉及一种从红藻角叉菜中提取化合物的提取方法，属药物植物化学提取工艺技术领域。

背景技术  

角叉菜，红藻门，杉藻科，角叉菜属，潮间带海藻，俗称海木耳。《中国海洋药物辞典》记载^[2]：角叉菜全体均可食、入药，具有润肠通便、和血消肿、止痛生肌之功效，主治慢性便秘、骨折、跌打损伤等症。角叉菜中含有多种抗菌和抗病毒的成分，不仅可以预防感冒，而且可以根除大范围的传染病，对B型流感和腮腺炎病毒都有较强的抑制能力。随着对天然产物的药理活性研究的深入，角叉菜多方面的生理活性被发现，已经引起国内外学者和产品研发人员的广泛关注。

角叉菜是一种重要的经济海藻，主要用于生产卡拉胶（也称角叉菜胶）。但是到目前为止，对角叉菜活性成分的研究仅限于对基本成分的常规分析以及早期分离得到的一些单一化合物。因此有必要对角叉菜的化学成分进行更深入的研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从红藻角叉菜中提取的化合物三磷酸腺苷及提取方法，本发明对角叉菜的化学成分进行进一步的研究，首先比较同一季节不同地点的角叉菜的营养成分的差别，用现代分离手段对角叉菜中的生理活性物质进行提取分离，采用现代波谱技术对提取物进行结构鉴定，并进行抗菌和免疫活性的研究，旨为角叉菜的开发和利用提供一定的依据。

本发明是通过以下技术方案实现的

一种从红藻角叉菜中提取的化合物，特殊之处在于该化合物命名为：三磷酸腺苷，其具有以下结构的化学式：

一种从红藻角叉菜中提取三磷酸腺苷的方法，其特殊之处在于包括以下步骤：

（1）、将红藻角叉菜粉末置于3-5倍其质量的溶剂中冷浸提取，保证浸泡后的溶剂质量浓度为80%-90%，过滤去除藻渣，合并提取液，减压蒸干溶剂，得深绿色油状浸膏；

（2）、先后用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取提取物浓缩液；

（3）、将正丁醇相萃取物采用硅胶柱层析，用氯仿：甲醇：水=7:3:0.1进行洗脱，利用TLC薄层色谱跟踪检测，根据Rf和颜色进行分段，合并Rf和颜色相同的部分，减压浓缩得七种混合物级分C1-C7，取C2备用； 

（4）、取C2再次用硅胶柱层析，用氯仿：甲醇：水=9:2:0.1，得C2-1、C2-2、C2-3、C2-4、C2-5；经过大量的筛选，取C2-4 用Sephadex LH-20柱经氯仿：甲醇=1:1洗脱，其中C2-4c，用氯仿反复洗涤，得到白色粉末状物质。

根据检测器紫外光谱图，对分离所得的每个色谱峰相同的样品进行收集合并相同成分，得到纯度大于98%的单体物质三磷酸腺苷。

上述提取过程的具体步骤如下：

（1）、将红藻角叉菜粉末置于3-5倍其质量的溶剂中常温冷浸7-10天，保证浸泡后的溶剂质量浓度为80%-90%，连续换溶剂3-5次，即进行3-5次提取；

所述的溶剂为乙醇；常温一般为20-30℃；

（2）、步骤1中的提取物过滤去除藻渣，合并上述3-5次的提取液，减压蒸干溶剂，即减压蒸干提取液中的酒精，得深绿色油状浸膏；

（3）、将步骤2得到的深绿色油状浸膏首先加水悬浮，然后用与悬浮液等量的石油醚常温萃取4-8次，合并石油醚相，减压浓缩得到深绿色浸膏；

（4）、步骤3所得的水相再加入与水相等量的乙酸乙酯常温萃取4-8次，合并乙酸乙酯相，减压浓缩得到棕黄色浸膏；

（5）、步骤4所得的水相再加入与水相等量的正丁醇常温萃取4-8次，合并正丁醇相，减压浓缩得到黄色浸膏；

    （6）、取100-200目的硅胶，110℃±5℃下活化25-35分钟，与石油醚混合，超声去气泡，然后湿法装入层析柱中，柱子尺寸：50×600mm，装柱高度：400mm，静置60-80小时；

（7）、收集步骤5中的正丁醇相萃取物，用甲醇溶解，用三倍其质量的60-100目硅胶拌样，干法上样，分别以氯仿：甲醇：水=7：3：0.1进行梯度洗脱，用50mL试管分段收集，每管收集45mL，利用TLC薄层色谱跟踪检测，根据Rf和颜色进行分段，合并Rf和颜色相同的部分，减压浓缩得七种混合物级分C1-C7；

 C1：第1-6管合并；C2：第7-19管合并；C3：第20-34管合并；C4：第35-47管合并；C5：第48-61管合并；C6：第62-72管合并；C7：第73-89管合并；