[发明专利]一种隐绿石蕊酸的精制方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然药物制备领域，具体涉及一种隐绿石蕊酸的精制方法。

背景技术：

隐绿石蕊酸(Cryptochlorophaeic acid)分子式为C₂₅H₃₂O₈，分子量为460.52，为无色针晶，mp.182-184℃。分布于石蕊科植物隐绿石蕊Cladonia cryptochlorophaea Asahina及梅衣科植物隐绿梅衣Parmelia cryptochlorophaea Hale中。近年来，随着药理研究的深入，隐绿石蕊酸的药理活性被发现，隐绿石蕊酸具有抑制兔肾微粒体中前列腺素生物合成。目前尚无大量制备隐绿石蕊酸的方法报道，本发明提供的方法能使隐绿石蕊酸的纯度达到98％，又适合工业化生产，成本低、环境污染小。

发明内容：

本发明的目的是提供一种低成本、产率高，可工业化生产的制备隐绿石蕊酸的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种隐绿石蕊酸的精制方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将富含隐绿石蕊酸的药材粉碎，加入适量蒸馏水和生物酶自然酶解，得到的酶解原料放入连续逆流渗漉提取系统中，采用酸水恒温提取；

(2)将渗漉液上聚酰胺柱，先用低醇溶液洗脱除去杂质，再用去离子水洗脱洗净醇，最后用碱水洗脱，收集洗脱液，盐酸调pH至3-4；

(3)将调酸后的洗脱液上大孔树脂柱吸附，先用2-4BV水洗脱，再用80-95％乙醇洗脱，收集醇洗脱液；

(4)将洗脱液浓缩，用有机溶剂萃取，弃去水相，再用酸水萃取除去杂质，减压浓缩有机相至浸膏状；

(5)将浸膏用葡聚糖凝胶柱色谱分离纯化，40-60％乙醇洗脱，获得高纯度隐绿石蕊酸。

步骤(1)中所述富含隐绿石蕊酸的药材为石蕊科植物隐绿石蕊Cladoniacryptochlorophaea Asahina或梅衣科植物隐绿梅衣Parmelia cryptochlorophaea Hale。

步骤(1)中生物酶的用量为0.4-0.6％，所述生物酶为半纤维素酶、纤维素酶、淀粉酶、果胶酶中的一种或几种混合。

步骤(1)中所述酸水为无机酸或有机酸的水溶液，pH控制在1-4，渗漉时间为10-24小时。

步骤(2)中所述低醇溶液为5-10％的乙醇水溶液。

步骤(4)中所述有机溶剂为乙酸乙酯或乙酸丙酯。

步骤(4)中所述酸水为pH为2-3的盐酸或硫酸水溶液。

本发明的有益效果是：

1、由于隐绿石蕊酸为酚酸类化合物，不稳定，因此选用酸水为提取溶媒，提取液中杂质少、隐绿石蕊酸纯度高；

2、本发明选用连续逆流渗漉提取，能耗低，生产效率高，且溶剂耗量低；

3、采用聚酰胺柱、大孔树脂柱、葡聚糖凝胶柱，使用的溶剂为乙醇水溶液，成本低，可回收反复使用。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

将隐绿石蕊药材粉碎，取3kg加入适量蒸馏水和15g半纤维素酶和淀粉酶(质量比为3∶1)自然酶解得酶解原料，将酶解原料放入连续逆流渗漉提取系统中，加入盐酸水溶液(pH2.5)15L冷浸3小时，渗漉18小时，流速1.5L/h，收集渗漉液27L，离心，上聚酰胺树脂柱，先用6-7％乙醇溶液洗去杂质，然后用去离子水将醇洗净，最后用0.04％碳酸钠水溶液洗脱，收集洗脱液，用盐酸调洗脱液至pH3.3，上HPD100大孔吸附树脂柱，用3BV水洗脱，再加90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，低温减压浓缩，用等体积的乙酸丙酯萃取3次，合并有机相，浓缩至1/3体积，加pH3的盐酸水溶液萃取浓缩的有机相6次，弃去水相，减压浓缩有机相成浸膏，40％乙醇溶解，上葡聚糖凝胶柱，50％乙醇洗脱，根据TLC合并洗脱液，低温减压浓缩干燥，温度控制在60℃，回收试剂，得3.0g产品(隐绿石蕊酸含量为98.93％)。

实施例2：