[发明专利]一种乳制品中α-乳白蛋白含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种乳制品中α-乳白蛋白含量的检测方法。

背景技术

α-乳白蛋白是一种天然乳清蛋白，是必需氨基酸和支链氨基酸的极好来源，是一种能结合钙的乳清蛋白，其成分接近人乳，不易过敏。α-乳清蛋白含有丰富的色氨酸，大量实验表明食用较高色氨酸含量的蛋白有助于提高血液中复合胺的释放，在动物实验中发现其有抗焦虑的作用。

目前测定乳制品中α-乳白蛋白含量的方法有很多，如酶联免疫法、电泳和毛细管电泳等几种方法。

但以上各种方法在测定α-乳白蛋白时都有一定的局限性，如酶联免疫法对试剂的选择性高，牛乳中蛋白质种类很多，很难有效的准确检测；电泳技术在定量方面有很大的局限性；毛细管电泳重复性差，容易堵塞。以上技术上的局限性限制了这些方法在实践中推广应用。

因而，探寻一种成本低廉、检测快速、准确、适用于复杂体系，如乳制品中α-乳白蛋白含量的检测方法是研究的首要问题。

高效液相色谱法(HPLC)是定量分析的有效测试方法之一，与其他方法相比具有分辨率和回收率高、重复性好、操作简便等优势。但是，目前关于高效液相色谱法分析α-乳白蛋白含量的检测方法还存在着色谱峰较多，难以进行定量分析以及分析时间过长等缺点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服了现有测定乳制品中α-乳白蛋白含量方法的成本高，准确性较差，分析时间长，样品中α-乳白蛋白含量低时测定不准确的缺陷，提供了一种乳制品中α-乳白蛋白含量的检测方法。本发明的检测方法目标物出峰时间短，峰形尖锐对称，分离度好，准确性高。

本发明提供了一种乳制品中α-乳白蛋白含量的检测方法，其包括如下步骤：按照本领域常规方法提取乳制品中的α-乳白蛋白，再通过高效液相色谱法测定含量；所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱为C₁₈色谱柱，等度洗脱，检测波长为210-230nm，洗脱液由流动相A和流动相B组成，所述流动相A和所述流动相B的体积比为80∶20-82∶18；所述流动相A是体积分数0.05-0.15％的三氟乙酸的超纯水溶液；所述流动相B为乙腈、超纯水和三氟乙酸的混合液；所述流动相B中：所述乙腈和超纯水的体积比为320∶100-480∶100，优选400∶100；所述超纯水和三氟乙酸的体积比为100∶0.4-100∶0.6。

其中，所述的C₁₈色谱柱可为现有的各种型号和规格的C₁₈色谱柱，如4.6mm×250mm和4.6mm×150mm等径长规格均可适用。本发明优选Agilent ZORBOX ECLIPSE XDB-C₁₈柱(4.6mm×250mm)。

其中，所述的检测波长较佳地为215nm。

其中，所述高效液相色谱法的其他色谱条件为本领域常规条件，优选条件为：流动相总流速较佳地为0.5-1.0mL/min，更佳地为0.8mL/min；柱温较佳地为30-40℃，更佳地为35℃。

其中，所述的乳制品是指本领域各种常规的乳制品，一般为液体乳或乳粉。所述的液体乳可以为鲜乳、杀菌乳、酸乳或配方乳。所述的乳粉可以为全脂乳粉、脱脂乳粉或配方乳粉。

其中，所述的提取乳制品中的α-乳白蛋白的方法优选下述操作方式进行：

①离心脱脂：将所述的乳制品离心，去除脂肪得脱脂样品；

②净化：将pH值为4.6的醋酸盐缓冲液和所述的脱脂样品混合均匀，离心后取上清液；

③过滤：过滤所述的上清液，得上机液。

步骤①中，所述离心的条件和方法为本领域常规的离心条件和方法。所述离心的温度较佳地为1-4℃。所述离心的速度较佳地为3500-4500转/分钟。所述离心的时间较佳地为10-15min。

步骤①中，根据本领域常规方法，所述的乳制品以液态形式进行离心，即当所述的乳制品为液态乳时，可直接将所述的液态乳进行离心；当所述的乳制品为乳粉时，需将所述的乳粉与水混合得乳液，再进行离心，乳粉与水的混合比例较佳地为1g乳粉∶5mL水-1g乳粉∶15mL水。

按本领域常识，步骤①中所述的脱脂样品可于-20℃保存，在24小时内进行步骤②即可。

步骤②中，所述醋酸盐缓冲液中醋酸的浓度为本领域常规浓度，较佳地为0.08-0.12mol/L。

步骤②中，所述的醋酸盐缓冲液和所述的脱脂样品的体积比较佳地为4∶1-6∶1。

步骤②中，所述混合均匀的条件和方法为本领域常规的条件和方法，较佳地用漩涡振荡器振荡1-2min。