[发明专利]一种天然抗氧化剂金福菇多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种天然抗氧化剂金福菇多糖的制备方法，属于食品加工领域。

背景技术

真菌因其营养和药用价值一直备受关注，目前已有多种具有药理作用的化合物从真菌中分离出来(如香菇多糖)。多糖在机体免疫调节、增强细胞抗肿瘤、抗氧化活性等方面具有重要的生物活性。大量研究证明，真菌多糖大多具有抗氧化活性，如：木耳多糖(Mau，2001)，冬虫夏草多糖(S.P.Li，2006)，灵芝多糖(Jing Xu，2009)等。真菌多糖的研究与应用已渗入到医药、食品、化妆品和饲料等多种领域，多糖研究已成为目前生命科学中最活跃的研究热点之一。

金福菇(Tricholoma lobayense Heim.)又名大白口蘑，属担子菌亚门层菌纲伞菌属口蘑科(白蘑科)，是一种发生于炎热季节的高温型正处于开发中的珍稀食用菌。金福菇在国内商品名称有洛巴伊口磨、洛巴口磨、大口磨等，法国真菌学家Heim最早发现于非洲，并于1970年定名。其子实体肥厚嫩白，味微甜、脆嫩而鲜美，耐贮性好，适于鲜销和干制加工，深受市场青睐，具有较好的开发价值。

目前这种食用菌在台湾售价不菲；日本近年也开始批量试种并投入市场，其商品名为白色松茸，金福菇子实体硕大，菌肉肥厚嫩白。有关专家指出，近年内金福菇将会发展成我国食用菌的主导产品。国外专家也认为：“在热带、亚热带国家，金福菇的商业性栽培有光明的前景”。

金福菇营养丰富，据分析每公斤干品中含蛋白质27.56％、总糖38.44％、粗脂肪9.58％、粗纤维8.20％。F.Liu(Gen.Pharmac.1996)通过体内外抑瘤实验表明金福菇糖蛋白具有免疫调节及抗肿瘤活性；H.X.Wang(Comp.Biochem.Physiol.Part B.2000)阐述了金福菇提取物30kDa蛋白具有抑制体外翻译的活性；而有关金福菇多糖抗氧化活性的研究尚未见有文献报道。本发明是从金福菇中提取得到了几种天然多糖组分，对其进行抗氧化活性研究发现：其中一个金福菇天然多糖组分TL-3具有很高的抗氧化活性，对超氧阴离子的清除能力与Vc几乎在同一个水平，具有重要的学术价值和广阔的商业化应用前景。

发明内容

本发明目的在于提供了一种天然抗氧化剂金福菇多糖的提取方法，并对其抗氧化活性进行检测，发现一个抗氧化活性高的金福菇多糖组分，可作为一种天然的抗氧化剂，广泛应用于食品、医药和化妆品等领域。经HPLC检测，其分子量为4.22×10³Da，单糖组成及摩尔比为阿拉伯糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖＝15.1∶2.3∶3.7∶1.8。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

天然抗氧化剂金福菇多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将金福菇烘至恒重，粉碎，过0.55mm筛；

(2)称取步骤(1)所得粉末，在80-90℃温度的热水中浸提2-4h，料液比1∶10-40，提取液浓缩后，3300-3800r/min离心18-22min，取上清液；

(3)将步骤(2)所得上清液浓缩至原体积的1/9-1/10，加入3.8-4.2倍体积的无水乙醇沉淀过夜，3300-3800r/min离心18-22min，收集沉淀物，冷冻干燥，得金福菇粗多糖；

(4)将步骤(3)所得金福菇粗多糖加入到18-22倍质量的蒸馏水溶解，按体积比1∶1加入Sevag试剂，剧烈振荡25-35min，3300-3800r/min离心18-22min，取上清液，浓缩、冷冻干燥得固体金福菇多糖；

抗氧化活性检测：

a：将步骤(4)所得多糖配成10％溶液，用DEAE-Sephorase F.F凝胶柱纯化，上样量为10mL，0-1mol/LNaCl溶液梯度洗脱，流速为1mL/min，自动部份收集器收集洗脱液，苯酚-硫酸法跟踪检测，经3.5×10³Da的透析袋透析后，浓缩、冷冻干燥得到纯化的金福菇多糖(TL-1)；

b：将步骤a所得多糖配成0.1％的溶液，过0.22μm的过滤膜，用Superdex200层析柱分离，0.02mol/L PBS(pH7.2，含0.15mol/L NaCl)洗脱，流速1mL/min，波长215nm紫外检测，同时用苯酚-硫酸跟踪检测；收集的含糖组分用3.5×10³Da的透析袋透析脱盐，透析液浓缩、冷冻干燥得两个金福菇多糖组分(TL-2和TL-3)；