[发明专利]一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纳豆芽孢杆菌，尤其涉及一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，属于生物技术领域。

背景技术

纳豆芽孢子杆菌是1905年东京大学的泽村教授(Sawamura)从纳豆中首次发现并分离出来的，并将该菌株命名为Bacillus natto Sawamura。此后于1946年经美国Smith等人的研究，认为纳豆芽孢杆菌应属于枯草杆菌的亚种，因此，此后，在分类上将纳豆菌归属于枯草杆菌。但由于纳豆菌的维生素要求性或以γ-聚谷氨酸为主要成分的粘质物生产特性，以及噬菌体的感染特异性显然与枯草杆菌不同，故还是将纳豆菌与枯草杆菌区别，使用纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto或Bacillus natto)的名称。

纳豆芽孢杆菌能够产生多种酶，能分解脂肪、碳水化合物、蛋白质等大分子物质，从而使用于发酵时发酵产品中含有丰富的寡聚糖、有机酸、氨基酸等多种容易被人体吸收的成分。因此，具有较高的营养保健等功效。纳豆芽孢杆菌还具有抗菌活性的作用，纳豆芽孢杆菌抗菌代谢产物对人体或畜牧均无毒副作用，因此，可作为天然的防腐剂来开发应用。如将它运用在食品添加剂方面，其作用可相当于防腐剂，由于其无毒无副作用，特别适合广大消费者对天然食品防腐剂这一特点的要求。虽然纳豆芽孢杆菌具有较多的优点，但是由于其抗菌性能存在效果不佳的缺陷，在应用上存在一定的限制性。

发明内容

本发明针对以上现有技术中存在的缺陷，提供一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，该方法具有提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的目的。

本发明的目的之一是通过下列技术方案来实现的：一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，该方法包括以下步骤：

A、活化：将纳豆芽孢杆菌菌种接种到斜面培养基上进行活化培养，从斜面上刮取活化后的纳豆芽孢杆菌，用无菌生理盐水配制成菌悬液；

B、复合诱变：取上述菌悬液与8-Mop混合制成含8-Mop的菌悬液，振摇，放入无菌平皿内，进行长波紫外线辐照，然后将上述经过长波紫外线辐照后的含8-Mop的菌悬液稀释后，涂布于平板培养基上进行培养，生长成熟后，挑选正常型单菌落接种到斜面培养基进行培养，在培养温度为25℃～35℃的条件下培养40～60小时，得到诱变后的纳豆芽孢杆菌菌体；

C、种子培养：将上述步骤B中诱变后的纳豆芽孢杆菌菌体接种到液体种子培养基进行摇床培养，培养温度为25℃～35℃，培养时间为24～48小时，培养结束后得到种子液；

D、发酵培养：将上述步骤C中得到的种子液接种到液体发酵培养基中进行摇床培养，培养温度为28～35℃，培养时间为36～60小时，培养结束后得到发酵液；

E、提取、筛选：将上述的发酵液进行离心分离，提取上清液，对上清液进行检测分析，筛选得到高抗菌性能的纳豆芽孢杆菌。

本发明的上述一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法中所述的纳豆芽孢杆菌的保藏编号为：CGMCC 1.1086。所述的斜面培养基及平板培养基都是采用本领域常规的培养基，所述的斜面培养基及平板培养基均为普通营养肉汤琼脂培养基。所述的普通营养肉汤琼脂培养基中含有以下组份的质量含量：蛋白胨：10.0g/L；牛肉膏粉：3.0g/L；氯化钠：5.0g/L；琼脂：14.0g/L；pH值为7.2±0.2；其余为蒸馏水。上述所述的液体种子培养基为LB液体培养基。所述的LB液体培养基中含有以下组份的质量含量：胰蛋白胨：10g/L；酵母提取物：5g/L；氯化钠：10g/L；调节pH值为7.0，其余为蒸馏水。利用本发明的方法对纳豆芽孢杆菌进行诱变培养后，并通过对诱变后的纳豆芽孢杆菌进行筛选，通过对其代谢产物的抗菌性能进行检测分析，确定具有高抑菌性能的诱变后的纳豆芽孢杆菌，上述步骤C至步骤E实质上是对诱变后的纳豆芽孢杆菌的筛选，通过筛选后得到诱变后的纳豆芽孢杆菌具有更高的抗菌性能，有利于提高其在产业上的应用。

上述的一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法步骤A中所述的菌悬液的浓度为10⁷～10⁸个细胞/mL。