[发明专利]一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法

权利要求书

1.一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

A、活化：将纳豆芽孢杆菌菌种接种到斜面培养基上进行活化培养，从斜面上刮取活化后的纳豆芽孢杆菌，用无菌生理盐水配制成菌悬液；

B、复合诱变：取上述菌悬液与8-Mop混合制成含8-Mop的菌悬液，振摇，放入无菌平皿内，进行长波紫外线辐照，然后将上述经过长波紫外线辐照后的含8-Mop的菌悬液稀释后，涂布于平板培养基上进行培养，生长成熟后，挑选正常型单菌落接种到斜面培养基进行培养，在培养温度为25℃～35℃的条件下培养40～60小时，得到诱变后的纳豆芽孢杆菌菌体；

C、种子培养：将上述步骤B中的诱变后的纳豆芽孢杆菌菌体接种到液体种子培养基进行摇床培养，培养温度为25℃～35℃，培养时间为24～48小时，培养结束后得到种子液；

D、发酵培养：将上述步骤C中得到的种子液接种到液体发酵培养基中进行摇床培养，培养温度为28～35℃，培养时间为36～60小时，培养结束后得到发酵液；

E、提取、筛选：将上述的发酵液进行离心分离，提取上清液，对上清液进行检测分析，筛选得到高抗菌性能的纳豆芽孢杆菌。

2.根据权利要求1所述的一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，其特征在于：步骤A中所述的菌悬液的浓度为10⁷～10⁸个细胞/mL。

3.根据权利要求1所述的一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，其特征在于：步骤B中所述的含8-Mop的菌悬液中8-Mop的质量浓度为1.0％～7.0％。

4.根据权利要求3所述的一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，其特征在于：步骤B中所述的含8-Mop的菌悬液中8-Mop的质量浓度为3.0％～5.0％。

5.根据权利要求1所述的一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，其特征在于：步骤B中所述的长波紫外线辐照的时间为5s～125s。

6.根据权利要求5所述的一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，其特征在于：所述的长波紫外线辐照的时间为45s～85s。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，其特征在于：步骤B中所述的挑选正常型单菌落接种到斜面培养基进行培养，所述的培养温度为28℃～30℃的条件下培养45～48小时。

8.根据权利要求1-6中任意一项所述的一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，其特征在于：步骤C中所述的培养温度为28℃～30℃，培养时间为30～40小时。

9.根据权利要求1-6中任意一项所述的一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，其特征在于：步骤D中所述的液体发酵培养基中含有以下组成的质量含量：胰蛋白胨：1～5g/L；酵母膏：1～20g/L；玉米浆：1～10g/L；葡萄糖：5～15g/L；甘油5～30g/L；可溶性淀粉：5～20g/L；CaCO₃：5～8g/L；NaCl：2～5g/L；pH值为7.0～7.4；其余为蒸馏水。

10.根据权利要求9所述的一种提高纳豆芽孢杆菌抗菌性能的方法，其特征在于：步骤D中所述的液体发酵培养基中含有以下组成的质量含量：胰蛋白胨：3～4g/L；酵母膏：4～10g/L；玉米浆：3～6g/L；葡萄糖：8～12g/L；甘油10～15g/L；可溶性淀粉：10～15g/L；CaCO₃：6～7g/L；NaCl：3～4g/L；pH值为7.0～7.4；其余为蒸馏水。