[发明专利]艰难梭菌外毒素A检测试剂盒及组成该试剂盒的单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及艰难梭菌外毒素A检测试剂盒及组成该试剂盒的单克隆抗体。

背景技术

艰难梭菌是一种革兰氏染色阳性、有芽胞、专性厌氧的梭状杆菌。当前，艰难梭菌感染的预防、诊断、治疗面临着重重困难。一方面，艰难梭菌广泛存在于院内环境中，而且作为其休眠形式的芽胞能够耐受多种院内常用的消毒剂，它已经成为仅次于弯曲杆菌的院内感染性腹泻的主要病原体；甲硝唑、万古霉素，作为治疗艰难梭菌感染的两种主要的药物，它们的耐药性也在不断地累积、传播，疗效日趋降低，而且对于复发病例的治疗，这两种药物呈现出无能状态。另外一方面，到目前为止，尚无有效的、商品化的疫苗问世；基于毒素的ELISA检测试剂盒价格昂贵，难以对艰难梭菌进行临床常规检测，也不适用于大规模的流行病学调查和长期监测；治疗性抗体作为一种安全、有效、廉价的抗生素替代品，前景光明却依然处于探索期。所以，急需开发安全、有效、方便、廉价的艰难梭菌疫苗来保护高危人群，在疫苗的基础上开发相应的单克隆抗体，为诊断试剂及治疗性抗体提供可能。

艰难梭菌通过粪口途径进入消化道，继而分泌外毒素而导致腹泻。毒素A既是一种肠毒素，又是一种细胞毒素，是艰难梭菌致病的主要毒力因子之一。研究发现，艰难梭菌外毒素A只有当其羧基端与靶细胞表面受体结合后才能够发挥毒性作用；艰难梭菌外毒素A的分子表面结构大部分为其羧基端所覆盖；针对艰难梭菌外毒素A羧基端的抗体，能有效抑制其肠毒性和细胞毒性，具有保护效应。所以，艰难梭菌外毒素A羧基端是疫苗研究和抗体开发的理想结构域。

DNA免疫是近年发展起来的一种新型抗体制备法。DNA免疫克服了传统蛋白质免疫方法的缺陷，能更为有效地激活机体的体液和细胞免疫应答。首先是在仅知DNA编码而不能获得目的蛋白，或获得的蛋白为低免疫性的情况下，通过DNA免疫可产生高效价特异性的抗体，这为单抗制备提供了一种简单易行的方法。同时DNA免疫因为存在体内抗原表达和递呈的过程，所以它最接近活细菌感染机体免疫反应过程并且很完整保存了抗原构象，由此产生的抗体对构想表位有更好的特异性，因此增加了得到具有中和抗体活性单抗的可能性。DNA免疫制备单抗为疾病的诊断和治疗提供新的思路。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测艰难梭菌外毒素A的试剂盒。

本发明的另一目的是提供组成该试剂盒的两株单克隆抗体。

本发明的又一目的是提供所述两株单克隆抗体的应用。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种检测艰难梭菌外毒素A的试剂盒，包含两种识别不同表位的抗艰难梭菌外毒素A羧基端抗原的单克隆抗体，分别为保藏号为CGMCC No.4979的杂交瘤细胞产生的抗艰难梭菌外毒素A羧基端抗原的单克隆抗体以及保藏号为CGMCC No.4980的杂交瘤细胞系产生抗艰难梭菌外毒素A羧基端抗原的单克隆抗体。

所述的辣根过氧化物酶标记的由保藏号为CGMCC No.4980的杂交瘤细胞系产生抗艰难梭菌外毒素A羧基端抗原的单克隆抗体的稀释度为1∶2000。

分泌抗艰难梭菌外毒素A羧基端单克隆抗体的杂交瘤细胞系，保藏号为CGMCC No.4979，保藏日期为2011年6月23日。

一种抗艰难梭菌外毒素A羧基端抗原的单克隆抗体，由所述的保藏号为CGMCC No.4979的杂交瘤细胞系产生。

所述的单克隆抗体在制备艰难梭菌外毒素的诊断试剂中的应用。

所述的单克隆抗体在制备治疗艰难梭菌外毒素感染的药物中的应用。

分泌抗艰难梭菌外毒素A羧基端单克隆抗体的杂交瘤细胞系，保藏号为CGMCC No.4980，保藏日期为2011年6月23日。

一种抗艰难梭菌外毒素A羧基端抗原的单克隆抗体，由所述的保藏号为CGMCC No.4980的杂交瘤细胞系产生。

所述的单克隆抗体在制备艰难梭菌外毒素的诊断试剂中的应用。

所述的单克隆抗体在制备治疗艰难梭菌外毒素感染的药物中的应用。

本发明的有益效果：

1、目前，国内尚无合适的检测艰难梭菌感染的诊断试剂盒，而国际上已研发成功的试剂盒价格昂贵，这也阻碍了国内艰难梭菌诊断的发展，本发明提供的艰难梭菌外毒素检测试剂盒，通过使用两株高亲和力的配对单抗，使检测艰难梭菌的灵敏度达到了国际标准。这一试诊断试剂盒的开发可极大的促使国内开展广泛艰难梭菌的研究，同时也可以对艰难梭菌感染进行大规模的流行病学调查和长期的监测。