[发明专利]同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚残留的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种液相芯片法同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的试剂盒。本发明还提供了同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚残留的方法和上述试剂盒的应用。

背景技术

醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate，MPA)是一种孕激素类药物，在兽药中被作为促生长剂，广泛用于安情助长和同步发情等方面以促进动物生长、提高饲料转化率、节省成本、提高经济效益，其对人具有广泛的毒副作用，能引起精神抑郁、过敏等不良反应，甚至引起乳腺癌和不孕不育症。欧盟成员国早已明令严禁在食源性动物饲养管理中使用，我国农业部2002年《动物性食品中兽药最高残留限量》文件中明文规定醋酸甲羟孕酮为禁止用于所有食品的动物兽药，食品中不能检出。己烯雌酚(diethylstilbestrol，DES)是一种非甾体激素，曾被广泛用于促进动物生长、增加瘦肉率，其药物原形或代谢产物不可避免地残留于食品动物的器官、组织或通过排泄物进入外界环境，成为环境雌激素，具有导致畸胎、癌瘤等严重的毒负作用。美国食品药物管理局(The US Food and Drug Administration，FDA)早在1979年就已禁止己烯雌酚用于动物催肥。1989年，欧盟对一切含有促生长激素的动物和动物性食品实施封关禁入。

我国农业部2002年《动物性食品中兽药最高残留限量》文件中明文规定该药为禁止用于所有食品的动物兽药，食品中不能检出。但是部分畜禽养殖户盲目追求经济效益、滥用DES的现象仍然存在。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种可同时检测醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的试剂盒，该试剂盒不仅可以实现快速、大批量检测，而且检测特异性和灵敏度高，更重要的在于它的高通量。

本发明要解决的另一个技术问题是，提供一种可同时检测水产品中MPA和DES残留的方法。旨在解决兽药残留检测单一、耗时、成本高等问题，也为进一步同时检测四个兽药残留指标奠定了基础。该方法的建立可满足水产品中甲孕酮和己烯雌酚残留检测快速、准确的要求，同时，为我国水产品兽药残留的日常监控提供一种新的适用方法。

液相芯片技术(xMAP)是一种可广泛应用于蛋白质、基因、受体/配体等多种生物反应的生物芯片技术平台，主要包括微球、探针分子、被检测物和报告分子四种成分。在微球的制造过程当中，掺入了两种不同的红色分类荧光，根据这两种荧光的比例不同，把球形基质分为100种，可以标记上100种不同的探针分子，能同时对一个样品中多达100种不同的目标分子进行检测。反应过程中，探针和报告分子都分别与目标分子特异性结合。反应结束后，使单个的微球通过检测通道，使用红、绿双色激光同时对微球上的红色分类荧光和报告分子上的绿色报告荧光进行检测，可确定所结合的检测物的种类和数量。液相芯片技术的高灵敏度、高通量、检测迅速等突出优点，对水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚残留进行检测，并可用于兽药残留的日常监控中。实验结果表明，通过调配微球、探针分子、被检测物和报告分子四种成分的比例，以及荧光成分的种类和比例，可以检测液体中的醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚。本发明在上述基础上完成。

本发明提供了一种同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚残留的试剂盒，包括抗体。所述的抗体是针对醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的单克隆抗体。

所述的抗体的制备方法是以醋酸甲羟孕酮以及己烯雌酚分别与牛血清白蛋白的偶联物作为免疫原，制备出单克隆抗体，并将之生物素化。

所述的试剂盒中的抗原为醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚分别与卵清白蛋白偶联所得到的偶联物，随后分别与液相芯片荧光微球偶联。

所述的试剂盒还包括SA-PE溶液和终止液。还可以包括微球稀释液。

所述的试剂盒还包括醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚的标准品溶液。

所述的标准品溶液的浓度包括25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL、1.6ng/mL、0.8ng/mL和0.4ng/mL。

本发明还提供了上述试剂盒的应用，即利用该试剂盒同时检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚残留，包括以下步骤：

前处理待测样品；

用上述试剂盒检测样品。

所述的检测水产品中醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚残留的步骤依次为：偶联有MPA和DES的微球加入处理好的醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚样品溶液，随后分别加入生物素化的醋酸甲羟孕酮和己烯雌酚抗体；然后加入稀释好的SA-PE，最后加入终止液，检测荧光强度。