[发明专利]以适体为识别单元的胶体晶体凝胶非标记可视化检测方法

权利要求书

1. 一种以适体为识别单元的胶体晶体凝胶非标记可视化检测方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

（1）胶体晶体水凝胶薄膜的制备：将单分散的胶体纳米粒子加入水凝胶前聚体溶液中，调节胶体纳米粒子溶液中胶体纳米粒子的质量百分数为10%～80%，超声分散，直至胶体纳米粒子溶液产生结构色；然后加入引发剂后，灌入模具，静置0.1～2 h，经紫外光照射聚合或烘箱内通过热固化法对结构色胶体溶液进行固化，即得胶体晶体水凝胶薄膜，将所得到的胶体晶体水凝胶薄膜从模具上剥落，洗涤后置于纯水中保存；

（2）适体修饰的胶体晶体水凝胶薄膜的制备：

通过化学键偶联方法将适体偶联在步骤（1）中洗涤后的胶体晶体水凝胶薄膜上，制成适体修饰的胶体晶体水凝胶薄膜，将制备好的薄膜用磷酸缓冲液洗涤之后得到检测用的胶体晶体水凝胶薄膜，测定检测用的胶体晶体水凝胶薄膜的反射光谱；

（3）目标分析物的检测：

将步骤（2）中得到的检测用的胶体晶体水凝胶薄膜在缓冲溶液中与待测样品混合进行适体和样品的特异性结合反应，反应完毕，洗涤后检测反应后的胶体晶体水凝胶薄膜的反射光谱，通过比较反应前后胶体晶体水凝胶薄膜的颜色或通过测定胶体晶体水凝胶薄膜的反射光谱，确定待测物质的含量。

2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步骤（2）采用的适体为分子识别单元，为核酸适体或RNA适体中的一种或多种。

3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步骤（1）采用胶体纳米粒子材料选自二氧化硅、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、二氧化钛、铁的氧化物、金、银中的一种或两种以上的材料；所述的水凝胶前聚体为丙烯酰胺、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸羟乙酯、醋酸丁酸纤维素、硅氧烷甲基丙烯酸酯、氟硅甲基丙烯酸酯、全氟醚、N-乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、甲基丙烯酸缩水甘油酯或二甲基丙烯酸乙二醇酯中的一种或两种以上的任意混合。

4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步骤（1）中胶体纳米粒子的粒径在10纳米到500纳米之间；所述胶体纳米粒子的浓度在10%～80%。

5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步骤（2）中适体修饰的化学键偶联方法选自氨基与氨基的反应、氨基与羧基的反应或羧基与羟基的反应中的一种或两种以上的任意组合。

6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步骤（3）中待测样品中检测对象为离子、药物分子、毒品分子、添加剂、小分子、神经递质、激素、蛋白质、酶、抗原抗体、细胞因子、生长因子、肿瘤标志物或各种生物分子中的一种。

7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步骤（3）中待测样品中检测对象为汞离子、铅离子、钾离子、可卡因、凝血酶中的一种。