[发明专利]肌钙蛋白Ⅰ血清快速检测试剂盒(胶体金法)

说明书

技术领域

本发明提供了一种快速检测心肌梗死病症的快速检测的肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒(胶体金法)。 

背景技术

心肌缺血性损伤，特别是急性心肌梗塞(AMI)是威胁人类生命的主要疾病之一，临床化学家和临床科学家一直努力寻找和探索特异性好、灵敏度高的血清指标，心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I，cTnI)具有高度的心肌特异性，当心肌细胞受损时，血液中的cTnI出现时间早，持续时间长，与心肌损伤程度及预后密切相关，因此，它可作为心肌损伤的一种特异性指标。 

发明内容

本发明提供了一种用于快速检测心肌梗死病症的肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒(胶体金法)，具有快速检测试，性能极其稳定，用户使用方便、能准确快速检测的功能。 

本发明是通过如下技术方案实现的： 

肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒(胶体金法)，其原理为：心肌钙蛋白I(cTnI)的分子量为22.5KD，其连同肌钙蛋白T和肌钙蛋白C构成结构复合物，在心脏中的细胞间钙信号肌动蛋白-肌球蛋白相互作用的转化过程中起着重要作用，人体中的cTnI与骨骼肌中的形式在结构上有所不同，它的氨基端上多了一个氨基酸残基，使得cTnI成为一个特异性的标志物，在心肌梗死(AMI)发生后，cTnI便迅速释放入血液循环中，本发明采用双 抗夹心免疫法，当标本加入样品槽后，通过结合垫和金抗体结合，复合物沿膜流动和抗体在检测区域反应，如果标本中存在有可检出浓度或更浓的标志物，就会在检测区出现一条色带，如果没有就会保持无色，标本继续移动至控制区域，出现粉红-玫瑰红的色带，说明试验正常结果有效。 

本发明同时公开了肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒(胶体金法)的制备及检测方法，其流程为： 

一、cTnI标记用单克隆抗体的预处理 

1.1  透析，纯化水，24小时； 

1.2  离心去上清，4～10℃，10000转/分钟、5分钟； 

1.3  BCA法则浓度(物料平衡)； 

1.4  PH的调节，0.1mol/LK2CO3量的确定； 

1.5  最佳标记量的确定； 

1.6  分装(5000人份量/支)、-20度冻存； 

二、试剂的配制 

2.1  1％的柠檬酸三钠的配制； 

2.2  1％的氯金酸的配制； 

2.3  0.01％的氯金酸的配制； 

2.4  0.1ml/L K2CO3的配制； 

2.5  10％的氯化钠的配制； 

2.6  1％的叠氮钠的配制； 

2.7  10％的BSA的配制； 

2.8  1mol/l PBS的配制； 

2.9  0.05mol/l PBS的配制； 

2.10  胶体金复溶液的的配制； 

三、胶体金的制备 

3.1  量取0.01％的HAuCL4溶液； 

3.2  加热至沸腾，迅速加入1％柠檬酸三钠溶液，搅拌均匀，100ml 0.01％的HAuCL4溶液加1.6ml 1％柠檬酸三钠溶液； 

3.3  继续加热10分钟，然后冷却至室温，用超纯水恢复至原体积； 

3.4  0.22μm微孔滤膜过滤除菌； 

3.5  送检、装瓶、贴标签； 

四、cTnI免疫金的制备和干燥 

4.1  cTnI标记抗体的稀释，按照每生产5000人份4mm宽的cTnI试纸条需1支cTnI标记抗体计算，领取相应量的抗体，用0.05mol/l PBS稀释到0.5mg/ml； 

4.2  生产前小试 

a  取1ml胶体金； 

b  调PH值，0.1mol/L K2CO3的量，混匀5min； 

c  根据生产指令加入CTnIAb1，混匀10min； 

d  加入100ul10％BSA，混匀10min； 

e  离心1000转/min，30min，要求环境温度4-10℃； 

f  30％复溶，浸泡聚酯膜0.8ml/条，0.6cm×30cm； 

g  温度20-30℃，相对湿度30-35％干燥5小时； 

h  送质检部检验； 

4.3  cTnI抗体标记 

1)标记小试质检质检合格，取胶体金，电磁搅拌，以生产1000人份5mm宽的肌钙蛋白I胶体金试纸条约需50ml胶体金来计算；