[发明专利]肌钙蛋白Ⅰ血清快速检测试剂盒(胶体金法)

权利要求书

1.肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒(胶体金法)，其原理为：心肌钙蛋白I(cTnI)的分子量为22.5KD，其连同肌钙蛋白T和肌钙蛋白C构成结构复合物，在心脏中的细胞间钙信号肌动蛋白-肌球蛋白相互作用的转化过程中起着重要作用，人体中的cTnI与骨骼肌中的形式在结构上有所不同，它的氨基端上多了一个氨基酸残基，使得cTnI成为一个特异性的标志物，在心肌梗死(AMI)发生后，cTnI便迅速释放入血液循环中，其特征在于：采用双抗夹心免疫法，当标本加入样品槽后，通过结合垫和金抗体结合，复合物沿膜流动和抗体在检测区域反应，如果标本中存在有可检出浓度或更浓的标志物，就会在检测区出现一条色带，如果没有就会保持无色，标本继续移动至控制区域，出现粉红-玫瑰红的色带，说明试验正常结果有效。

2.根据权利要求1所属的肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒(胶体金法)，其制备及检测方法，其流程为：

一、cTnI标记用单克隆抗体的预处理

1.1  透析，纯化水，24小时；

1.2  离心去上清，4～10℃，10000转/分钟、5分钟；

1.3  BCA法则浓度(物料平衡)；

1.4  PH的调节，0.1mol/LK2CO3量的确定；

1.5  最佳标记量的确定；

1.6  分装(5000人份量/支)、-20度冻存；

二、试剂的配制

2.1  1％的柠檬酸三钠的配制；

2.2  1％的氯金酸的配制；

2.3  0.01％的氯金酸的配制；

2.4  0.1ml/L K2CO3的配制；

2.5  10％的氯化钠的配制；

2.6  1％的叠氮钠的配制；

2.7  10％的BSA的配制；

2.8  1mol/l PBS的配制；

2.9  0.05mol/l PBS的配制；

2.10胶体金复溶液的的配制；

三、胶体金的制备

3.1  量取0.01％的HAuCL4溶液；

3.2  加热至沸腾，迅速加入1％柠檬酸三钠溶液，搅拌均匀，100ml 0.01％的HAuCL4溶液加1.6ml 1％柠檬酸三钠溶液；

3.3  继续加热10分钟，然后冷却至室温，用超纯水恢复至原体积；

3.4  0.22μm微孔滤膜过滤除菌；

3.5  送检、装瓶、贴标签；

四、cTnI免疫金的制备和干燥

4.1cTnI标记抗体的稀释，按照每生产5000人份4mm宽的cTnI试纸条需1支cTnI标记抗体计算，领取相应量的抗体，用0.05mol/l PBS稀释到0.5mg/ml；

4.2  生产前小试

a  取1ml胶体金；

b  调PH值，0.1mol/L K2CO3的量，混匀5min；

c  根据生产指令加入CTnIAb1，混匀10min；

d  加入100ul10％BSA，混匀10min；

e  离心1000转/min，30min，要求环境温度4-10℃；

f  30％复溶，浸泡聚酯膜0.8ml/条，0.6cm×30cm；

g  温度20-30℃，相对湿度30-35％干燥5小时；

h  送质检部检验；

4.3  cTnI抗体标记

1)标记小试质检质检合格，取胶体金，电磁搅拌，以生产1000人份5mm宽的肌钙蛋白I胶体金试纸条约需50ml胶体金来计算；

2)调PH值，0.1mol/L K2CO3的量，混匀5min；

3)根据最适标记量加入CTnIAb1，混匀10min；

4)加入100ul10％BSA，混匀10min；

5)离心1000转/min，30min，4-10℃；

6)30％复溶，浸泡聚酯膜25.3ml/张，20cm×30cm；

7)温度20-30℃，相对湿度30-35％干燥5小时；

8)抽一条0.6cm宽送质检部做膜金匹配检测；

9)cTnI免疫金送中间品室暂存；

五、cTnI包被板的制备

5.1包被抗体的稀释，羊抗鼠Ig0.05mol/LPBS稀释到1.2mg/ml工作浓度，cTnI捕获抗体用0.05mol/LPBS稀释到1.1mg/ml工作浓度；

5.2包被前小试

1)各取20ul试包被1条20cm长的膜，线浓度1.0ul/cm；

2)2℃-8℃过夜；

3)贴膜；

4)温度20-30℃、相对湿度30-35％干燥5小时，最后送质检部检验质检合格；

5.3包被生产

1)cTnI包被小试质检合格单；

2)羊抗鼠IgG、cTnI捕获抗体工作浓度包被质控线和检测线，线浓度1.0ul/cm；

3)2℃-8℃过夜；

4)贴膜；

5)温度20-30℃、相对湿度30-35％，干燥5小时；

6)抽1板送质检部作膜金匹配；

7)密封后送中间品库暂存。

3.根据权利要求1所属的肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒(胶体金法)，其检测流程为：采用以上技术方案制作标本，加入样品槽后，通过结合垫和金抗体结合，复合物沿膜流动和抗体在检测区域反应，其分为以下三种情况：

(一)、阳性：15分钟后出现两条色带，说明结果阳性试验有效，只要在检测区域出现有色带即可以读取结果，很低浓度的cTnI会在长于15分钟的时候出现两条带；

(二)、阴性：如果在检测区域没有条带而控制区域有条带，说明结果阴性而试验有效；

(三)、无效试验：如果在控制区域没有任何条带，说明试验无效，标本应选用另一个新的卡片重新测试。