[发明专利]一种带有间隔臂的羧化聚苯乙烯微球上偶联蛋白质的方法

权利要求书

1.一种带有间隔臂的羧化聚苯乙烯微球上偶联蛋白质的方法，其特征是步骤如下：

1)微球的活化；采用1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺活化羧化聚苯乙烯微球，活化后的聚苯乙烯微球表面引入了磺酸基；

2)蛋白质的偶联；

3)切向流过滤分离残留的抗体与胶乳微球；

4)以及微球的封闭四个步骤。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是所述的步骤1)采用如下方法：

取0.5-2.5ml浓度为1％-5％质量分数的羧化聚苯乙烯微球，加去离子水或蒸馏水稀释到0.5-2倍后，分别加入20-180μl 1mg/ml的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺，室温反应10-40min。

3.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤2)采用如下方法：

向第一步活化后的微球溶液中加入4mg-20mg的蛋白质溶液，37℃反应1-5小时。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤3)采用如下方法：

采用截留分子量为300KD或500KD的膜包，20-100mM三羟甲基氨基甲烷或甘氨酸缓冲液为洗液，切向流过滤除去未与微球偶联的蛋白质。

5.如权利要求4所述的方法，其特征是所述的缓冲液的pH为6.5-8.0。

6.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤4)采用如下方法：

收集切向流过滤后的微球溶液，羧化聚苯乙烯微球经上述反应最终通过切向流过滤可收集10-20ml，向此收集液中加入15-30mg的牛血清白蛋白对微球表面没有偶联蛋白质的残留位点进行封闭。