[发明专利]液体植酸酶稳定性的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种液体植酸酶稳定性的测定方法。

背景技术

磷是动物所必需的矿物元素之一，在动物日粮中提供充足的磷非常重要。植物性饲料原料中虽然含有大量的磷，但是其中有60-80％是以植酸磷的形式存在，而在单胃动物和水产动物中缺乏分解植酸磷所需的酶，磷的利用率仅为0-30％，因此需要在饲料中添加大量的无机磷来补充磷的不足。这样会造成饲料成本的大量增加，同时饲料中的植酸磷不能被动物所利用，被大量排泄到动物体外，造成对土壤和水的严重污染。

植酸酶是一种能将饲料中的植酸磷水解成为无机磷和肌醇的饲用酶制剂，对单胃动物的饲喂效果已经得到了广泛的认可。单胃动物饲料中加入植酸酶后，可以将植物性饲料中本身磷的利用率提高到60％以上，减少50-70％的无机磷用量，粪便中磷的排出量减少30-40％以上，并且大大降低植酸盐的抗营养作用，对提高畜牧生产效益、降低环境污染具有重要的意义。

然而，在中国的饲料工业中，70％以上的饲料是颗粒饲料。在饲料制粒过程中，一般温度要达到80-85℃，高者可达到90℃，其对作为热敏物质的植酸酶活性破坏严重。对经过颗粒机环模挤压成型冷却后的颗粒饲料使用液体植酸酶以雾化方式喷涂于颗粒表面，可以防止颗粒饲料热加工过程对植酸酶活性的破坏，同时可以适当降低酶制剂的使用量，降低饲料成本，这就是液体植酸酶后喷涂技术。

液体植酸酶中含有大量的水，而水是所有化学反应的介质，相对于固体植酸酶来说，液体植酸酶在储存、运输和使用过程中的稳定性比较差。液体植酸酶的稳定性能是评价其品质优劣的关键。

液体植酸酶是一种有机物溶液，某些杂质含量(包括有机物和无机物)，在一定条件下会引起液体植酸酶产生大量不溶性沉淀，然后产生两种不良后果，一是引起植酸酶变性，酶活性降低；二是引起植酸酶后喷涂喷雾效果差，单位体积雾滴数减少，甚至堵塞管道和喷头。目前消除这种负面作用的方法有两个途径：一是尽量降低液体中杂质含量。二是通过特定稳定技术促进有机物溶解，防止析出不溶物。

现有的评价液体植酸酶稳定性的方法，一是只通过观察有无沉淀来定性的判断其稳定性，二是未考虑实际运输、储存和使用过程中震荡因素对其澄清度和酶活的重要影响。从下表1可以看出，有些液体植酸酶震荡相对静置来说，酶活失活严重；吸光度上升，澄清度严重下降。

表1为植酸酶样品在静置或震荡条件下的酶活、吸光度变化情况的比较

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明人致力于液体植酸酶稳定性的测定方法的研究，将“震荡”和“吸光度”这两个概念引入液体植酸酶稳定性的测定方法中，从而更好地帮助使用者准确了解和比较各种液体植酸酶的稳定性能的优劣。

本发明的目的是提供一种可以有效地定量比较各种液体植酸酶的稳定性能优劣的方法，特别是提供一种通过比较震荡前后液体植酸酶的吸光度和酶活活性的变化来判断不同液体植酸酶稳定性的优劣的方法。本发明的方法为液体植酸酶生产质量控制和客户使用提供有效的判别途径。

因此，本发明提供了一种液体植酸酶稳定性的测定方法，该方法包括：1)将液体植酸酶在6℃～60℃的温度震荡处理10分钟～120小时；2)在步骤1)的处理过程中选取至少一个时间点测定该液体植酸酶震荡前后的吸光度和酶活；3)根据步骤2)中的吸光度的变化评价澄清度的稳定性，以及根据步骤2)中酶活的变化评价酶活活性的稳定性。

本发明中，步骤1)中所述的温度优选为30～45℃，优选地，所述的温度选为6℃、25℃、37℃或45℃，最优选地，所述的温度为37℃或45℃；步骤1)中所述的时间优选为30分钟～24小时，其中，37℃时最优选24小时，45℃时最优选1小时；并且震荡处理的强度优选为100～300转/分钟，更优选为150～300转/分钟，最优选为200转/分钟。

本发明中，步骤1)中，最优选地，所述温度为45℃，所述时间为1小时，并且所述震荡处理是在转速为200转/分钟下进行。

本发明中，优选地，所述时间点为震荡处理时间。

本发明中，步骤2)中，优选地，在546nm下使用分光光度计测定该液体植酸酶震荡前后的吸光度；并且优选地，按照GB/T18634-2009方法测定该液体植酸酶的酶活。

本发明中，步骤3)中，优选地，所述酶活的变化可为下列公式(1)表示的酶活存留率：酶活存留率＝存留酶活/初始酶活×100％(1)，其中，存留酶活为震荡处理后的酶活，初始酶活为震荡处理前的酶活。