[发明专利]一种柴胡药材的鉴定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种中药药材的的鉴定方法，特别涉及一种柴胡药材的的HPLC鉴定方法。 

背景技术：

柴胡属(Bupleurum L.)植物是伞形科(Umbelliferae)植物中的一个大属，据报道全球有柴胡属植物约200种，主要分布在欧亚大陆及北非，我国已报道有42种，17种变种及7种变型。我国药典规定柴胡(Bupleurum Chinense DC.)或狭叶柴胡(B.Scorzonerifolium Willd.)为正品供药用，二者一般习称为“北柴胡”及“南柴胡”[1]。我国柴胡资源丰富，北柴胡主产于辽宁、甘肃、河北、山东等地，南柴胡主要产于湖北、四川、江苏、安徽等地。柴胡性味苦，微寒，归肝胆实经，具有解表和里，疏肝解郁，升提中气之功效，可祛肠胃中结气、饮食积聚、寒热邪气而推陈致新，主治感冒发热、寒热往来、胸胁腹痛、黄疸肝炎及月经不调等症。近代药理研究表明柴胡不仅具有镇痛、解热、镇咳、抗炎、抗病原体、抗溃疡等作用，还具有保肝、调节免疫的功能，尤其是对心血管系统也有显著作用。为有效控制药材质量，本文根据所含化学成分的特性和指纹图谱研究方法，对不同产地的柴胡药材进行高效液相指纹图谱研究。 

不同产地的柴胡药材，如果含有不同的成分甚至含有有害成分，则会导致不良后果，为鉴别柴胡药材，保证药材的同一性，本发明提供了一种便捷快速，灵敏度高的鉴别方法，同时建立一种柴胡药材的指纹图谱。 

发明内容：

本发明提供一种柴胡药材的鉴定方法，该方法包括以下步骤： 

步骤1、对照品溶液的制备； 

步骤2、供试品溶液的制备； 

步骤3、将步骤1和步骤2所述的溶液分别注入HPLC色谱仪中，得到色谱图； 

步骤4、对色谱图的相似性进行比较，两者相似表明供试品合格。 

其中，步骤1对照品溶液的制备，方法如下： 

取柴胡皂苷a对照品一定量，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.1mg/ml柴胡皂苷a溶液。 

其中，步骤2供试品溶液的制备，方法如下： 

取柴胡药材4g，加入50ml水，回流提取，第一次1h，第二次1h，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加95％醇沉，过夜，抽滤，滤液减压浓缩后，定容至25ml量瓶中。 

其中，步骤3的色谱条件如下： 

色谱柱：Zorbax SB-C18柱(250mm×4.6mm ID，5μm，Agilent) 

流动相：乙腈∶水(含0.05％磷酸)梯度洗脱如下： 

检测波长：220nm 

流速：1.0mL·min-1 

柱温：25℃ 

进样量：10μL 

本发明还提供一种柴胡药材的指纹图谱，该指纹图谱是柴胡皂苷a的用本发明的方法测定的高效液相色谱图。 

本发明通过试验验证，正经本发明的指纹图谱切实可行。 

本发明的指纹图谱的建立，是经过筛选获得的，筛选过程如下 

精密度 

取柴胡药材(山西)4g，按“供试品溶液的制备”项下操作，在上述色谱条件下重复进样6次。结果表明，各峰的相对保留时间的RSD为0.3％，相对峰面积的RSD为1.6％，符合指纹图谱要求。 

重复性试验 

取柴胡药材(山西)4g，按“供试品溶液的制备”项下操作，平行制备6份供试品溶液。结果表明，各峰的相对保留时间的RSD为0.8％，相对峰面积的RSD为4.6％。 

稳定性试验 

取柴胡药材(山西)4g，，按“供试品溶液的制备”项下操作，在上述色谱条件下，分别在0，2，4，6，8h进样分析。结果表明，各峰的相对保留时间的RSD为1.1％，相对峰面积的RSD为3.7％，说明供试品溶液在室温放置8小时内稳定。 

流动相的选择 

考察了乙腈-水，乙腈-0.1％磷酸水溶液，乙腈-0.05％磷酸水溶液，甲醇-0.1％冰乙酸水溶液，乙腈-0.1％冰乙酸水溶液以及乙腈-0.1％冰乙酸水溶液梯度洗脱，根据主要成分的性质，采取，乙腈-0.05％磷酸水溶液梯度洗脱，分离效果较好，保留时间适中。 

色谱柱的选择 

考察了相同条件下，十八烷基键合硅胶、八烷基键合硅胶以及苯基、氨基键合硅胶的固定相对柴胡药材中各成分分离度的影响，结果显示，使用十八烷基硅烷键合硅胶柱，柴胡中各成分分离度高，色谱峰尖锐，分离时间短。 

柴胡色谱指纹图谱特征峰的确立