[发明专利]一种多肽

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽，相应的核酸分子，包含上述核酸分子的构建体和/或载体和/或细胞，和/或包含所述多肽、核酸分子、构建体、载体和/或细胞的组合物。本发明进一步涉及上述多肽、相应的核酸分子、包含上述核酸分子的构建体和/或载体和/或细胞、和/或组合物，用于医疗用途，优选用于治疗传染病。此外，本发明涉及所述多肽、核酸分子、构建体、载体、细胞和/或组合物作为抗菌剂、优选作为食品添加剂或消毒剂的应用，或在用于检测细菌、优选用于诊断应用中的应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌是一种主要的人类病原体，其通常牵涉若干严重的传染病和食物中毒。由于新出现的耐抗生素菌株，它的治疗变得越来越困难。来自感染金黄色葡萄球菌的噬菌体的内溶素已表明潜在地控制这些病原体并可以用于它们的特异性检测。在大多数情况下，靶向葡萄球菌物种的内溶素应用的主要障碍是低酶活性、难以大批量生产和/或蛋白质稳定性。

总是需要关于例如抗微生物活性和/或稳定性具有改善特性的新抗菌剂。

发明内容

本文报道的是新表征的Ply2638，金黄色葡萄球菌噬菌体Φ2638a的内溶素。上述酶和若干工程化衍生物以可溶性方式表达在大肠杆菌中并在冻干（冷冻干燥，lyophilisation）以后显示出乎意料的稳定性，如在重建（重构，reconstitution）以后由它们的裂解活性所证明的。除细胞壁结合域（其结合葡萄球菌属的细胞壁）之外，我们还示出，两个功能域，即M23内肽酶域和酰胺酶域对于最佳的裂解活性是至关重要的。

我们示出，具有催化结构域的酶的改造和/或源自金黄色葡萄球菌Φ11内溶素、内溶素、和溶葡萄球菌素的细胞壁结合域的复制产生异源多肽融合产物，其在冻干和重建以后具有增强的裂解活性和/或改变的pH最适点（最适度，optimum）和/或增加的稳定性。

核酸分子

在第一方面，提供了一种核酸分子，其包括第一核苷酸序列或由第一核苷酸序列组成，所述核苷酸序列与SEQ ID NO:12具有80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%的序列同一性（关于所有本文使用的SEQ ID NO的概述参见表1）。优选地，所述第一核苷酸序列具有至少282、285、290、300、310、320、330、340、350、360或370个核苷酸，更优选至少381个核苷酸的长度，和/或至多510、480、450、420或390个核苷酸的长度。优选地，所述核酸分子具有至少282、285、290、300、310、320、330、340、350、360、370个核苷酸，更优选至少381个核苷酸的长度，和/或至多4500、4200、3900和/或3600个核苷酸的长度。优选地，所述核酸分子具有至少1200、1230、1260、1290、1320、1350、1380、1410、1440、1470、1500、1530或1560个核苷酸的长度，和/或至多4500、4200、3900和/或3600个核苷酸的长度。还优选的是，按照本发明的核酸分子具有至少1890、1920、1950、1980、2010、2040、2070、2100、2130或2160个核苷酸的长度，和/或至多4500、4200、3900和/或3600个核苷酸的长度。优选地，所述第一核苷酸序列编码细胞壁结合域，其结合葡萄球菌属的肽聚糖细胞壁。优选地，所述第一核苷酸序列源于金黄色葡萄球菌噬菌体Φ2638a内溶素。

如估计自与ALE-1的C端92个残基的晶体结构的序列对比（Lu et al.,J.Biol.Chem.,2006,281(1):549-58），据估计，来自源自金黄色葡萄球菌噬菌体Φ2638a内溶素的细胞壁结合域的最少94个氨基酸可以足以将上述酶引导到葡萄球菌属的细胞壁。

可以利用技术人员公知的测定来评估（结构）域与葡萄球菌属的肽聚糖细胞壁的结合。在优选的实施方式中，免疫组织化学技术和/或基因融合技术（其产生标记的构建体）用来评估肽、多肽或蛋白质与葡萄球菌属的肽聚糖细胞壁的特异性结合。在上述免疫组织化学或融合技术中所使用的信号的定量方法是本领域公知的。