[发明专利]半抗原和免疫反应试剂以及其在获得关于喹诺酮类的家族抗体和免疫测定法中的用途

说明书

本发明涉及半抗原、免疫原和次级免疫反应试剂，其用于获得针对喹诺酮类型抗生素的广谱抗体的用途，和其在用于分析生物样品中的所述抗生素的免疫化学技术中的应用。

现有技术

食品的营养品质、其可获得性和其安全性对于社会福利来说是关键要素。提高动物生产力的需要已导致在不合适的情形下使用兽医学药物。

更具体而言，以治疗目的使用喹诺酮类型抗生素，但也以预防目的进行使用，其目的是在具有高圈养密度的农场中防止疾病。以这种方式，促进了细菌抗性机制的形成，从而在当所述细菌是人类疾病的根源时，剧烈地降低了治疗效力。

因此，欧洲医药产品评价机构（EMEA）已经在关于食品安全的Directive2377/90/CE中确立了在各种不同的动物来源食品中的最大残留限量（MRL，Maximum Residue Limit）。还向检验实验室强制实行了一系列规范，其涉及取样频率和在这些产品到达消费者之前要控制的物质的数目（Directive96/23/CE）。这产生了施行高次数的分析的需要。

目前用于检测喹诺酮类的技术主要是气相色谱-质谱联用法（GC-MS）和具有各种不同检测类型（主要是紫外线和质谱法）的高效液相色谱法（HPLC）（Hernández-Arteseros,J.Chromatography A.2002,945,1-24）。这些技术的主要缺点是，它们要求复杂的仪器和熟练的人员，此外还需要样品的事先准备，这延长了分析时间。

还采用微生物学类型的测定法，其尽管花费较少，但在结果获得方面的延迟连同其本身的方法学一起使得它们作为快速警报方法变得不可行。因此，现行的用于样品分析和制备的方法未充分地满足法规为保护公共卫生所需要的要求。免疫化学方法提供了重大的优点，例如筛选方法，这归因于其简单性、费用和高的处理能力。

在文献中已经描述了各种不同的用于喹诺酮类的一般性免疫测定法。在所有情况下，免疫接种用的半抗原是通过在位置3处的羧酸（Holtzapple,Food and Agric.Immunol.1997,9,13-26；Bucknall,Food Additives and Contaminants.2003,20,221-228；Wang,Anal.Chem.2007,79,4471-4483）或者通过在位置7处的哌嗪残基（Huet,J.Agric.Food Chem.2006,54,2822-2827）与免疫原性蛋白质相连接的商业喹诺酮，如此封闭了喹诺酮类家族的共同的且重要的表位。

现有技术并未致力于通过位置1来将喹诺酮半抗原连接至免疫原性承载体的方法。以这种方式，所述半抗原保留了喹诺酮类的所有特征性表位，从而使其对于宿主动物免疫系统的暴露最大化并同时使该类型化合物的酸碱特性保持完整。

本发明提供了所述半抗原和衍生自这些半抗原的免疫反应试剂，其在获得针对喹诺酮类的经改善的家族抗体中是有用的，并且当在用于检测喹诺酮类的免疫测定法中进行使用时，其提供更好的帮助。

发明描述

本发明涉及一组从化学观点来看在结构上与喹诺酮类型抗生素有关的半抗原。同样地，本发明还涉及由于将所述半抗原与免疫原性承载体相连接而得到的免疫反应试剂，和这些试剂在获得具有对于喹诺酮类家族的类别选择性的抗体中的用途。再者，本发明还涉及在用于分析生物样品中的喹诺酮类的免疫化学方法中任一种所述免疫反应试剂作为次级免疫反应试剂的应用以及从任一种所述免疫反应试剂产生的任一种抗体的应用。

在第一个方面，本发明涉及式（I）的化合物：

其中，

R₁选自OH、O-C₁-C₁₀烷基、OR₄、NHR₄，其中R₄为免疫原性承载体；

R₂选自H、C₃-C₁₀烷基、-(CH₂)_m-R₅R₆，其中m为3至6的值，当R₅选自O或NH时；或者m为1至6的值，当R₅为S且R₆选自H、C₁-C₆烷基、芳基、烷基芳基、R₄或LR₄时，其中L为双官能连接化合物；