[发明专利]与再生障碍性贫血相关的膜突蛋白片段

说明书

技术领域

本申请总体涉及对自身免疫性疾病的分子生物学和医学研究。更具体地，本申请关注基于独特存在的与再生障碍性贫血相关的特定自身抗体的方法和组合物。

背景技术

自身免疫性疾病是由免疫系统对患者自身物质和组织的异常应答引起的疾病。共有超过80种不同类型的自身免疫性疾病，其总的来说是导致慢性疾病的第二位的原因，在最高达64岁的所有年龄组中其是导致女性死亡的前十位的死因之一。

人们已在医学研究方面投入了大量精力用于了解自身免疫性疾病的机制以及寻找有效的诊断和治疗方法。目前多种自身免疫性疾病的特征是自身抗体的存在并且具有不良活性。这些自身抗体通常识别并结合至正常和健康的自身抗原，进而导致相关组织和器官的明显损伤和衰竭。

获得性再生障碍性贫血，也称为再生障碍性贫血(AA)，是一种罕见的但是致命的血液疾病，其特征为骨髓停止或减少制造血细胞。据信骨髓无法补充血细胞是造血细胞被破坏的结果——多能干细胞正常情况下产生全部三种类型的血细胞——红细胞、白细胞和血小板。因此，如果没有早期诊断，AA患者会发展成严重的症状，如果没有及时治疗可能是致命的。贫血，即红细胞数减少，导致血红蛋白缺乏和低氧(缺氧)；白细胞减少，即白细胞的数量减少，使得个体更容易感染；以及血小板减少，即血小板数量减少，使血液不容易凝血，导致出血、瘀伤和全身无力的风险增加。

再生障碍性贫血可能由多种内在和环境因素导致，如遗传缺陷、暴露于有毒的化学品、化疗及其他药物、辐射、病毒以及甚至是妊娠。由外在因素引起的那些，即获得性再生障碍性贫血，更为常见。人们认为AA的一个重要的病理生理机制是与自身免疫性应答相关，其中机体的免疫系统错误地发出攻击并破坏骨髓中的造血细胞。Young等，Blood，108：2509-19(2006)。近年来，伴随干细胞移植的免疫抑制已成为AA的主要疗法之一。

通过对自身免疫性疾病患者的血清进行免疫检测，已鉴定了多种自身免疫性疾病。此类靶抗原之一为膜突蛋白——膜组织延伸刺突蛋白，已发现其与类风湿性关节炎(RA)患者的自身抗体反应。Wagatsuma等，Mol.Immuol.，33：1171-6(1996)。最初是从牛子宫中鉴定出膜突蛋白，其特征为可能作为肝素的受体。Lankes等，Biochem J.251：831-42(1988)。进一步的研究将膜突蛋白作为埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白(ERM)蛋白家族成员。这些蛋白主要在细胞质中表达，集中在富含肌动蛋白的细胞-表面结构中。其充当细胞质膜和肌动蛋白细胞骨架之间的结构连接体，在形成微绒毛、细胞间粘附、维持细胞形状、细胞活动性和膜运输中发挥作用。随后的研究揭示其还参与了生理性和病理性的信号转导。Louvet-Vallee，Biol.Cell92：305-16(2000)。

ERM蛋白的序列和结构分析显示，其在种间和分子间具有高度的同源性。ERM蛋白具有三个结构域：称为FERM结构域的N-末端结构域(条带4.1、埃兹蛋白、根蛋白、膜突蛋白同源结构域)，因为其与条带4.1蛋白具有同源性，中心螺旋结构域和C-末端尾结构域。C-末端尾结构域与F-肌动蛋白结合，而C-末端尾结构域负责与细胞质膜中的粘附分子结合。Louvet-Vallee(2000)。

Wagatsuma等(1996)报告了在RA患者中检出抗-ERM自身抗体。在已检测的71个患者血清中，有24个样品(33.8％)与至少一个重组ERM抗原反应且有10个样品(14％)仅与重组膜突蛋白反应。然而，该研究未发现在抗-ERM抗体的存在与临床表现如疾病的持续时间或阶段之间具有明显的相关性。此外，在其他自身免疫性疾病患者如原发性Sojgren综合症(PSS)和系统性红斑狼疮(SLE)患者的血清中未发现任何针对这三个ERM蛋白的反应性。

Shcherbina等研究了ERM蛋白在血细胞中的表达类型和功能性质。Shcherbina等，FEBS Letters443：31-6(1999)。已发现膜突蛋白是在不同类型的血细胞中表达的主要ERM 蛋白。使用蛋白酶钙激活蛋白酶进行的裂解实验显示在完整受激淋巴细胞中，膜突蛋白对钙激活蛋白酶治疗具有抗性，而埃兹蛋白对钙激活蛋白酶敏感。对钙激活蛋白酶敏感性的这种差异提示这些ERM蛋白在血细胞中具有不同的特殊功能。在血小板中，膜突蛋白是所检测到的唯一的ERM蛋白，其表达随血小板的活性而改变。在循环状态下，发现膜突蛋白在外周表面光滑的血小板中表达。当血小板活化时，发现膜突蛋白在新形成的微绒毛上表达，提示其在调节血小板功能方面具有积极作用。