[发明专利]用于稳定和长期移植的免疫抑制药物组合

说明书

发明领域和背景

本发明，在其一些实施方案中，涉及免疫抑制药物组合和更特别但不排他地涉及其用于诱导稳定和持久细胞或组织移植的用途。

多年来，实现特定和持续的免疫耐受是移植药物所追求的目标。实现该目标的一种主要方法是通过移植可潜在定位至胸腺、持续呈递供体抗原，并藉此诱导抗供体T细胞克隆进行性缺失的造血干细胞。该想法60多年前被提出，并显示牛二卵双生的子宫内循环交换对形成的血液成分实现交叉耐受，然而，多年以来发现出生后跨越主要遗传障碍实现造血嵌合状态呈现困难挑战。

在接受单倍同一性移植体的患者中甚至跨越主要HLA差异可实现全供体类型嵌合状态。移植物抗宿主疾病的问题可通过使用广泛T细胞缺失的移植物来预防，而移植排斥的问题可通过使用超致死调节(conditioning)结合大剂量的干细胞来成功克服。然而，虽然在遭受侵袭性血液恶性肿瘤的患者中至少20%的高移植相关的死亡率(使用HLA相同的患者)可能是合理的，但是对于不在即将死亡威胁下的经受器官移植的患者该比率是不可接受的。

最近，Kawai 等 [Kawai T. 等, N Engl J Med. (2008) 358:353-361]在人中证明，来自HLA单一-单倍型错配的供体的组合骨髓(BM)和肾移植体后数月，可终止所有免疫抑制治疗而不显著影响移植体功能。然而，该方法的常规临床应用受为允许甚至MHC错配的BM的短暂移植而需的的细胞减少性调节的严重毒性的限制。此外，虽然该方法需要广泛的免疫缺失，但是实现仅短期和短暂的造血嵌合状态。据信，该系统的耐受机制涉及诱导仅短暂的外周耐受的调节性T细胞。

为了进一步改善由CD4+CD25+ T调节性细胞(Treg)实现的嵌合状态，Pilat 等在用抗-CD40L和CTLA4-Ig两者共刺激阻断下，移植了包括同种异体反应性T细胞在内的总小鼠BM。给予宿主Treg连同短暂雷帕霉素处理引起低水平嵌合状态而不需要任何清髓性(myeloablative)预调节[Pilat N. 等, Am J Transplant. (2010) 10:1-12]。然而，由于其促血栓形成作用在人中使用抗-CD40L是有问题的，且所使用的必需的大量Treg可能难以从患者收集。此外，在BM移植物中包含同种异体反应性T细胞呈现移植物抗宿主疾病(GVHD)风险，其在涉及非恶性条件的应用中是不可接受的。

在1989年本发明人首次证明，同种异体造血干细胞移植(HSCT)的排斥可通过使用大剂量的造血干细胞来克服[Lapidot T. 等, Blood (1989) 73:2025-2032]。然而，干细胞接种物的显著增加在人中难以实现。使用G-CSF以促进来自BM的造血CD34干细胞的动员并从外周血中收集这些细胞显著增加了可从单一供体中收获的祖细胞的数量。用外周收集的动员的祖细胞富集常规T细胞缺失的骨髓(TDBM)，使得在人中测试干细胞剂量递增的想法成为可能。由Reisner Y. 和 Martelli M.F.所进行的试验性研究首次显示，在人中，如同在小鼠中，细胞剂量递增促进T细胞缺失的错配造血干细胞移植体的移植[Aversa F 等 Blood (1994) 84:3948-3955; Reisner Y 和 Martelli Immunol Today (1995) 16:437-440]。数次修改后，开发了使用由Milteny磁珠分离的CD34+细胞的优化方案，并在高风险白血病患者中进行临床检查。在超过93%的患者中证明了单倍同一性大剂量移植体的初次移植具有低GVHD率，且未使用GVHD预防[Aversa F 等, 同上]。未能移植的少数患者在第二次移植后实现移植。因此，通过使用大剂量的纯化干细胞移植物，使用容易获得的单倍同一性家族成员作为用于BM移植的来源，并增加尤其是缓解期急性白血病患者的干细胞供体混合物，可克服遗传障碍。随后，本发明人显示，CD34+细胞克服由宿主T细胞所呈现的障碍的机制涉及CD34+细胞部分内由细胞所具有的特定调节活性，其仅抑制针对供体pMHC的宿主T细胞[Rachamim 等 Transplantation (1998) 65:1386–1393]。此外，后来使用同种异体反应性细胞毒性T细胞前体CTLp的有限稀释分析显示，该耐受活性(tolerizing activity)受TNF-α诱导的凋亡通过基于缺失的机制的介导[Gur H 等 Blood. (2005) 105: 2585-2593]。因此，消除仅针对供体Ag的宿主T细胞同时放过可进一步存在并对抗感染性病原体的其他T细胞的固有特异性，可为诱导移植耐受提供特定和有效的模式。