[发明专利]减少炎性反应的具有减少的脂磷壁酸的重组乳杆菌

说明书

发明领域

本发明涉及用于减少炎症的方法和组合物。

对作为文本文件通过EFS-WEB提交的序列表的引用

序列表的正式副本作为文本文件通过EFS-Web与说明书一起提交，其遵从美国信息交换标准码(ASCII)，文件名称为406734seqlist.txt，创建日期为2011年6月16日，大小为15.7 KB。通过EFS-Web提交的序列表为说明书的一部分，因此通过引用以其整体结合到本文中。

发明背景

肠道免疫稳态的维持涉及细菌微生物区系、肠上皮与宿主先天免疫细胞之间的平衡相互作用。这些免疫相互作用的失调可导致免疫功能障碍并引起明显的炎症，这是人炎性肠病(IBD)，包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病通常所具有的。尽管还未完全理解IBD的细胞和分子机制，但数据表明炎性细胞因子(例如IL-12)诱导的慢性肠炎症起关键作用。这些细胞因子启动对强烈牵涉疾病进展的致病性CD4+ T细胞的分化。相应地，研究显示对这些细胞的调节减轻实验性结肠炎。此外，如IL-12、活化树突状细胞(DC)利用IL-12p40亚基分泌的IL-23也牵涉多种自身免疫疾病(包括IBD)的发展。IL-23的炎性性质已被归因于对Th17的诱导。此外，该细胞因子还激活DC中炎性细胞因子例如TNFα和IL-6的产生。合起来，研究显示阻断IL-12p40亚基信号转导显著减少炎症，并表明IL-12和IL-23二者参与导致IBD的炎性级联。与此二者细胞因子相反，IL-10对炎性信号发挥调节作用，从而调节炎性细胞因子引发的免疫反应。

益生菌(probiotic)微生物可与宿主免疫细胞相互作用，并且特定益生菌乳杆菌种类可刺激DC产生炎性细胞因子(即IL-12)和调节性IL-10。乳杆菌是人胃肠道中的正常栖居者(inhabitant)，且为小肠中天然小型生物群的主要组分。认为这些细菌是有益的共生物，并且一些种类和菌株由于人类消费的历史悠久而被普遍认为是安全的。

本领域需要进一步的方法和组合物以改进炎性胃肠病症例如IBD的治疗。

发明简述

提供用于减少受试者炎症的方法和组合物。所述组合物包含经遗传修饰以减少细胞表面上脂磷壁酸(lipoteichoic acid)展示的重组细菌。方法包括给予受试者经修饰以减少细胞表面上脂磷壁酸展示的重组细菌。给予所述重组细菌促进所需的治疗反应。所述重组细菌可以以单剂量或系列剂量给予。方法在治疗或预防多种炎性病症包括，例如，治疗或预防炎性肠病、结肠炎或克罗恩病中得到应用。

附图简述

图1(A和B)显示LTA生物合成相关通路和基因。C-D显示使用剪接重叠延伸(SOEing) PCR扩增和连接的靶ORF内部区域侧翼的两个非邻接片段(Horton, RM (1995) Mol Biotechnol. Apr;3(2):93-9)。将所得片段克隆到pORI28并转化到包含温度敏感型辅助质粒pTRK669的嗜酸乳杆菌(L. acidophilus) NCK1392中。利用PCR，使用靶区域侧翼的引物，针对缺失突变对ERM敏感型细胞进行筛选，并通过对包含缺失的区域进行测序来确认。

图2 (A)显示用NCK56(也称为嗜酸乳杆菌NCFM)或NCK2025处理的DC的表型。将骨髓来源的DC与NCK56或NCK2025共培养24小时。细胞用相应的抗体染色，固定，随后用FACSCalibur分析。B部分显示单独培养或与NCK56或NCK2025 1:1培养1和6小时的DC。提取RNA、反转录并使用针对TLR1和TLR2的引物进行实时PCR。所显示数据表示单独的DC或这些细胞与NCK56或NCK2025的共培养物(1小时)。C部分显示细胞因子分析。通过ELISA测定NCK56或NCK2025处理以及未处理DC的上清液中释放的细胞因子。D部分显示T细胞增殖。连续四天用NCK56或NCK2025口服治疗多组C57BL/6小鼠(5/组)。取得肠系膜LN-T细胞，并与NCK56或NCK2025处理的以及未处理的DC共培养4天以使用[³H]胸苷掺入测定T细胞增殖。在一些实验中，为恢复抑制的T细胞增殖，将抗IL-10抗体加入来源于与NCK2025共培养的DC的上清液中。来源于各组小鼠的肠系膜LN-T细胞与用嗜酸乳杆菌菌株处理或未处理的DC共培养以测定细胞因子。