[发明专利]改进的抗-血清白蛋白结合变体

说明书

本发明涉及抗-血清白蛋白免疫球蛋白单一可变结构域DOM7h-11的改进的变体，以及包含这种变体的配体和药物缀合物、组合物、核酸、载体和宿主。

发明背景

WO04003019和WO2008/096158公开了具有治疗有用的半衰期的抗-血清白蛋白(SA)结合部分，如抗-SA免疫球蛋白单一可变结构域(dAbs)。这些文献公开了单体抗-SA dAbs以及包含这种dAbs的多特异性配体，例如，包括抗-SA dAb和特异性结合目标抗原如TNFR1的dAb的配体。公开了特异性结合来自多于一个物种的血清白蛋白的结合部分，例如人/小鼠交叉反应的抗-SA dAbs。

WO05118642和WO2006/059106公开了为了增加药物的半衰期而将抗-SA结合部分，如抗-SA免疫球蛋白单一可变结构域，缀合或结合至药物的概念。其公开并例举了蛋白、肽和新的化学实体(NCE)药物。WO2006/059106公开了使用这种概念以增加促胰岛素释放试剂(insulintropic agents)，例如，肠降血糖素激素如胰高血糖素样肽(GLP)-1的半衰期。还可参考Holt等, “Anti-Serum albumin domain antibodies for extending the half-lives of short lived drugs”, Protein Engineering, Design & Selection, vol 21, no 5, pp283-288, 2008。WO2008/096158公开了一种很好的抗-SA dAb，DOM7h-11。期望提供作为DOM7h-11的变体并特异性结合血清白蛋白,优选来自人和非人物种的白蛋白的改进的dAbs，这将在疾病的动物模型中以及对于人的治疗和/或诊断提供实用性。还期望在相对温和和高亲和力的抗-SA结合部分(dAbs)之间提供选择。这种部分可以连接至药物，根据设想的最终应用选择抗-SA结合部分。根据抗-SA结合部分的选择，这允许更好地定制药物以治疗和/或预防慢性或急性适应症。还期望提供是单体或者在溶液中基本上如此的抗-SA dAbs。以拮抗受体为目的，当抗-SA dAb被连接到特异性结合细胞表面受体如TNFR1的结合部分例如dAb时，这是特别有利的。抗-SA dAb的单体状态在减少受体交联的机会中是有用的，因为可以结合并交联细胞表面上的受体(例如，TNFR1)的多聚体形成的可能性更小，从而增加了受体激动和有害的受体信号传递的可能性。

PCT/EP2010/052008和PCT/EP2010/052007公开了许多改进的dAbs，其公开内容被引用并入。

还期望提供具有改进稳定性的改进的dAbs。这对于允许dAb具有合适的稳定性特征或储存时间是有利的。具体而言，期望提供具有暴露于升高的温度后耐受解折叠(unfolding)的改进的能力，即改进的热稳定性，的dAbs。还期望提供当形式为构建体如多特异性配体或者当缀合于蛋白、肽或NCE时具有改进的稳定性的dAbs。

发明概述

本发明的方面解决了这些问题。

为了这个目的，本发明人惊讶地发现，可以对DOM7h-11系的免疫球蛋白单一可变结构域分子进行突变，得到由相对于母体DOM7h-11分子的改进的热稳定性所测定的分子的改进的稳定性。

在一个方面中，提供了DOM7h-11(DOM7h-11如图1中所示)的抗-血清白蛋白(SA)免疫球蛋白单一可变结构域变体，所述变体具有至少54℃的T_m。在另一个方面中，提供了DOM7h-11(DOM7h-11如图1中所示)的抗-血清白蛋白(SA)免疫球蛋白单一可变结构域变体，所述变体具有高于54℃的T_m。转化中点(T_m)为其中50％蛋白是在其天然构象并且其它50％是变性的温度。合适地，通过差示扫描量热法测定所述T_m。

在一个实施方案中，与DOM7h-11相比，所述变体在22、42或91位(根据Kabat编号)中任何位置包含至少一个突变。合适地，抗-SA免疫球蛋白单一可变结构域变体是DOM7h-11-15(DOM7h-11-15如图1(SEQ ID NO：7)中所示)的变体，与DOM7h-11-15相比，在22、42或91位(根据Kabat编号)中任何位置包含至少一个突变。在一个实施方案中，变体包含选自下列的至少一个突变：