[发明专利]单克隆抗体在纤毛虫宿主细胞中的表达

权利要求书

1.用于异源表达单克隆抗体(mAb)、或者其片段或衍生物的系统，所述系统包含：

a)至少一种纤毛虫宿主细胞，以及

b)掺入所述纤毛虫宿主细胞的编码所述单克隆抗体、或者其片段或衍生物的至少一种异源核酸分子。

2.权利要求1所述的系统，其中所述单克隆抗体(mAb)、或者其片段或衍生物具有基本上无岩藻糖的N-聚糖结构。

3.权利要求1或2所述的系统，其中所述单克隆抗体(mAb)、或者其片段或衍生物具有至少一种选自以下的作用：

·增加的抗体依赖性细胞的细胞毒作用(ADCC)，

·增加的补体依赖性细胞毒作用(CDC)，

·增加的抗体依赖性细胞凋亡，和/或

·增加的抗体依赖性调理作用。

4.权利要求1-3中任一项所述的系统，其中所述单克隆抗体(mAb)、或者其片段或衍生物具有延长的血清半衰期。

5.权利要求1-4中任一项所述的系统，其中所述系统还包含：

c)与所述核酸分子可操作连接的启动子，和/或

d)与所述核酸分子可操作连接的信号序列，所述信号序列负责将由所述核酸分子编码的单克隆抗体或者其片段分泌入细胞外介质。

6.提供了用于转染纤毛虫宿主细胞的载体，所述载体包含编码单克隆抗体(mAb)、或者其片段或衍生物的至少一种核酸分子。

7.用于异源表达单克隆抗体(mAb)、或者其片段或衍生物的系统，所述系统包含已通过至少两个权利要求1所述的纤毛虫宿主细胞的接合而获得的纤毛虫宿主细胞。

8.纤毛虫宿主细胞，其转染了至少一种权利要求7所述的载体，或者是通过至少两个权利要求1所述的纤毛虫宿主细胞的接合而获得的。

9.包含至少两个权利要求8所述的纤毛虫宿主细胞、或者至少两种权利要求7所述的系统的文库，其中每一宿主细胞已掺入至少一种编码抗体、或者其片段或衍生物的异源核酸分子、优选以载体的形式掺入，以及其中选择至少两个纤毛虫使得它们能够彼此接合。

10.权利要求1-5或7中任一项所述的系统、或者权利要求8所述的纤毛虫宿主细胞，所述纤毛虫是四膜虫科的成员。

11.单克隆抗体(mAb)、或者其片段或衍生物，所述抗体或片段用权利要求1-5或7中任一项所述的系统、用权利要求8所述的纤毛虫宿主细胞、和/或用权利要求15-17中任一项所述的方法产生。

12.权利要求11所述的单克隆抗体、片段或衍生物，其结合至少一种表1(ADCC)或表3(非ADCC)列出的靶标。

13.权利要求11或12所述的单克隆抗体、片段或衍生物，其选自：

·鼠科的、嵌合的、人源化的和/或人mAb，

·IgG、scFv、Fab和/或F(ab)2，和/或

·修饰的抗体模式。

14.权利要求11-13中任一项所述的单克隆抗体、片段或衍生物，其具有至少一个选自以下的特征：

·增加的ADCC、CDC、和/或抗体依赖性细胞凋亡，

·延长的血清半衰期，和/或

·双特异性、三特异性或多特异性。

15.用于在纤毛虫宿主细胞中产生至少一种单克隆抗体(mAb)、或者其片段或衍生物的方法，所述方法包括以下步骤：

a)用至少一种编码所述单克隆抗体、或者其片段或衍生物的核酸分子、或者优选地用至少一种权利要求6所述的载体，转染至少一种纤毛虫宿主细胞，以及

b)在允许蛋白质表达的条件下培养所述宿主细胞。

16.用于在纤毛虫宿主细胞中产生至少一种单克隆抗体(mAb)、或者其片段或衍生物的方法，所述方法包括以下步骤：

a)用至少一种编码抗体、或者其片段或衍生物的核酸分子、或者优选地用至少一种权利要求6所述的载体，转染至少两个不同的纤毛虫宿主细胞，

b)使所述两个纤毛虫宿主细胞或其后代接合，以便获得携带编码至少两种不同抗体、或者其片段或衍生物的至少两种不同核酸分子的至少一种纤毛虫细胞，以及

c)在允许蛋白质表达的条件下培养由此产生的纤毛虫细胞。