[发明专利]FRET测量方法及FRET测量装置

说明书

技术领域

本发明涉及通过激光照射供体分子（第一分子）接收能量、能量从供体分子转移到受体分子（第二分子）的FRET（Fluorescence Resonance Energy Transfer:荧光共振能量转移）的测量方法及装置。具体而言，对于感受体和向心配合体结合，且设置有供体分子和受体分子的测量样品照射激光，由此求出解离常数的FRET测量装置和测量方法。

背景技术

目前，作为医疗、制新药、食品产业中后基因的相关技术，蛋白质的功能分析变得越来越重要。特别是，为了分析细胞作用，需要研究活细胞中活体物质的蛋白质与其它蛋白质或低分子化合物之间的相互作用（结合、分离）。

利用荧光共振能量转移（FRET）现象对活细胞中活体物质的蛋白质和其它蛋白质或低分子化合物之间的相互作用进行分析。对通过FRET现象产生的荧光进行测量，由此能够对几纳米波段中的分子间的相互作用进行测量。

例如，公开了一种利用FRET发生时的供体分子的荧光寿命τ^*_d和受体分子不存在时的供体分子的荧光寿命τ_d，求出表示从供体分子向受体分子的能量转移程度的FRET效率的技术（专利文献1）。

在上述专利文献1中，FRET效率根据1-τ^*_d/τ_d求出。

但是，所述FRET效率受供体分子或受体分子的浓度的影响，因此利用所述技术定量地求出包含在细胞等中的蛋白质的相互作用的强度变得困难。

通常，作为表示分子相互作用时的结合强度的指标，利用解离常数K_d。但是，有时不容易精确测量解离常数K_d。下面，针对解离常数K_d进行说明。例如，下述式（a）所示的反应的情况，解离常数K_d被定义为如下述式（2）。其中，L表示向心配合体，R表示感受体，LR表示与向心配合体结合的感受体。另外，[L]表示不与感受体结合的向心配合体的浓度（下面，称之为“向心配合体浓度”），[R]表示不与向心配合体结合的感受体的浓度（下面，称之为“感受体浓度”），[LR]表示与向心配合体结合的感受体的浓度。

[数1]

L+R⇔LR---(1)]]>

[数2]

Kd=[L][R][LR]---(2)]]>

其中，如果将包含在样品中的全体向心配合体浓度表示为[L_o]，全体感受体浓度表示为[R_o]，则[L_o]、[R_o]由下面的关系式表示。

[数3]

[L₀]＝[L]+[LR]            (3)

[R₀]＝[R]+[LR]            (4)

如果根据式（2）和式（4）消除[R]，则能够得到下述式（5）。

[数4]