[实用新型]人可溶性MICA蛋白酶联免疫吸附测定试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于检测可溶性MICA（sMICA）分子的试剂盒。 

背景技术

酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay, ELlSA）是将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机的结合起来的一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，可敏感的检测体液中的微量的特异性蛋白。 

MICA（MHC class I related chain A）基因，是人类主要组织兼容复合体I类（MHC I）相关的基因之一。MICA分子是表达在细胞膜表面的糖蛋白。与MHC-I类分子不同，MICA的表达仅局限于人体纤维细胞、内皮细胞和大多数的肿瘤细胞。在应急和感染的情况下，MICA分子的表达增高。在肿瘤细胞的转移和器官移植的状况下，MICA的表达也有增高的现象。NKG2D作为重要的激活性受体，可与MICA分子结合。从而激活NK细胞和CD8+T细胞的杀伤效果。NKG2D-MICA是机体先天免疫激活的重要活化通路。除了膜结合的MICA蛋白的分子形式外，MICA膜分子可能被酶切作用释放进入外周血循环，形成游离的可溶性MICA（Solube MICA, sMICA）分子，在肿瘤患者血液中尤为明显。近年来有研究检测血清中sMICA浓度在肝病患者明显增高，包括慢性肝病患者和肝细胞肝癌患者。而且他们还发现血清高浓度的sMICA能够在体外实验中下调NK细胞的NKG2D受体表达量。大量研究表明sMICA浓度的变化与许多疾病的发生发展相关，具有一定的诊断价值。 

发明内容

本实用新型要解决的技术问题是：提供一种检测sMICA蛋白的ELlSA试剂盒，其操作简便，成本低，稳定性好，适合于血液及其它生物液体中sMICA蛋白的检测。 

为了解决上述技术问题，本实用新型所采用的技术方案是：一种人可溶性MICA蛋白酶联免疫吸附测定试剂盒，包括酶标板，所述酶标板包括固相载体1和包被层3，固相载体1上设置有多个微孔2，包被层3附着在固相载体1的微孔2表面，包被层3是由抗人可溶性MICA蛋白单克隆抗体和牛血清白蛋白依次涂布在微孔2上形成的复合层。本实用新型采用ELlSA方法的试剂盒可以定量检测血液或其它来源生物液体中可溶性MICA蛋白含量，显著提高了可溶性MICA蛋白检测结果的准确度；并且灵敏度高，特异性强，几乎不受液体中其它物质，如酶抑制剂、激活剂等的影响，不受药物的干扰，且操作简单，省时省力，特别适用于可溶性MICA蛋白的检测。 

附图说明

图1本实用型新一具体实施例酶标板结构示意图。 

图2本ELlSA试剂盒对标准sMICA*008不同稀释浓度的检测。 

图3正常人群血清sMICA浓度分布。 

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步说明，以使得本领域的技术人员可以更好的理解本实用新型并能予以实施，但所举实施例不作为对本实用新型的限定。 

如图1所示，本实用新型试剂盒的酶标板，其包括固相载体1和包被层3，固相载体1采用96孔聚苯乙烯试剂板（PS）。固相载体1上有多个微孔2，包被层3附着在固相载体1上的微孔2上。包被层3是包括小鼠抗人可溶性MICA蛋白单克隆抗体和牛血清白蛋白的复合层。 

该具体实施例的试剂盒制备方法是：可采用96孔、48孔、60孔或12孔板。或8～12孔的联排管，例如采用96孔聚苯乙烯试剂板（PS）作为固相载体，先将其置于紫外光下辐照2小时，是PS板活化。在试剂板微孔2上先包被一定浓度的捕获抗体，该捕获抗体是小鼠抗人可溶性MICA蛋白单克隆抗体，为IgGl亚型。4℃过夜，经洗板及牛血清白蛋白封闭处理后制成包被好的酶标板，以备标本检测。