[发明专利]一种苯二氮卓类药物检测试剂盒及其制备

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫胶体金检测试剂盒，尤其涉及一种苯二氮卓类药物相关的免疫胶体金快速检测试剂盒及其制备。

背景技术

苯二氮卓类药物是临床广泛使用的一类药物，多为1，4-苯并二氮的衍生物，主要包括地西泮(安定)、氟西泮(氟安定)、氯氮、奥沙西泮和三唑仑等，具有镇静催眠、抗焦虑、抗惊厥、肌肉松弛等作用。然而，大剂量使用苯二氮卓类药物会致共济失调，过量急性中毒可致昏迷和呼吸抑制，久服会产生身体和精神依赖性，产生依赖性的风险随剂量的增加及治疗期的延长而增加。一旦出现身体依赖性，立即停药会出现戒断症状，包括头痛、肌肉痛、极度焦虑紧张、烦躁、兴奋和谵妄。严重时会出现失眠、意识障碍、失去理智、听觉过敏、麻木、四肢麻刺感，出现幻觉和癫痫发作。且苯二氮卓类药物与酒精和其他镇静催眠药合用后可导致中毒死亡。

鉴于其严重的危害性，苯二氮卓类药物已被国家列入精神药品进行管理。苯二氮卓类药物最普遍的使用方法为口服形式，其代谢速度快，绝大部分在人体内转变为代谢物随尿液排出体外。然而这些代谢物消除缓慢，清除时间很长，数月或数年使用此药物的个体，即使在停止用药后的几周甚至几个月里都能在尿液中持续检测到苯二氮卓。

目前对苯二氮卓类的检测主要使用薄层色谱扫描、气相和液相色谱分析，这些方法不仅需要昂贵的仪器设备，对检材的要求也比较高，需要进一步的提纯处理才能进行。

对于苯二氮卓类抗体的研究国外在二十世纪八、九十年代有少数的报道，由于苯二氮卓类药物属于小分子物质，要想得到相应的抗体，首先需将其与载体物质相连接，具有免疫原性，才能够利用免疫学技术得到相应的抗体。目前，苯二氮卓类抗体在免疫学方面的应用主要通过酶放大酶免疫实验、荧光偏振免疫测定、放射免疫法等方法。虽然这些检测方法灵敏，但也因所使用的仪器和设备非常昂贵，不易于基层工作的展开。免疫胶体金技术这种检测方法，可直接对血液、尿液、体腔液中的苯二氮卓类药物进行检测，不需要对样品进行处理，且具有快速、易于使用、便于指导临床和侦察的特点。

国内现有的苯二氮卓类药物检测方法的相关专利有：专利号200920165271.7，其提供了一种定量快速检测苯二氮卓类药物的上转磷光检测试剂条，与胶体金方法相比耗时长。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术，如酶放大酶免疫实验、荧光偏振免疫测定、放射免疫法等测定方法检测苯二氮卓类药物速度慢、操作复杂等缺点，提供一种快速、方便、灵敏的不依赖专门设备的苯二氮卓类药物检测试剂盒及其应用。

本发明一方面提供了一种苯二氮卓类药物的检测试剂盒，它包括试剂条，试剂条从加样端开始依次为滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫胶体金纸片为包被有胶体金标记的抗苯二氮卓单克隆抗体的玻璃纤维垫片，所述免疫硝酸纤维素膜为设有检测线(T线)和质控线(C线)的硝酸纤维素膜，所述检测线上包被有苯二氮卓-牛血清白蛋白复合物，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。

进一步的，所述胶体金标记的抗苯二氮卓单克隆抗体中，胶体金的粒径为39-42nm，纳米金与抗苯二氮卓单克隆抗体的标记比例为2分子纳米金标记1分子抗苯二氮卓单抗。

所述苯二氮卓类药物为1，4-苯并二氮的衍生物，包括但不限于地西泮(安定)、氟西泮(氟安定)、奥沙西泮、阿普唑仑、氯硝西泮、服利宁、氯甲西泮、利眠宁、羟基三唑仑和普拉西泮。

上述苯二氮卓类药物的检测试剂盒的工作原理，既是利用高度特异的抗体-抗原特异结合反应及免疫膜层析技术，通过免疫竞争抑制法来定性检测人尿液中出现的苯二氮卓类药物。检测时，当尿液从试剂盒加样孔加入，渗透到试剂条的加样垫上，如果尿液中含有苯二氮卓类，它们首先与玻璃纤维片上胶体金标记的抗苯二氮卓单克隆抗体结合形成苯二氮卓类-抗苯二氮卓单克隆抗体-胶体金复合物，在毛细作用下复合物层析至T线区，当苯二氮卓类浓度达到产品设计的阈值浓度以上时，它们将占据抗苯二氮卓单克隆抗体上全部的抗原结合位点，阻止了抗苯二氮卓单克隆抗体-胶体金和检测区的苯二氮卓-载体复合物的结合，检测区不能捕获到胶体金颗粒而无红色色带出现，为阳性结果。如果尿液中没有苯二氮卓类或苯二氮卓类的浓度低于阈值浓度，则抗苯二氮卓单克隆抗体-胶体金随同尿液运行至检测区，检测区捕获到胶体金颗粒而呈现红色色带，为阴性结果。

在试纸条上的质控线(C线)包被有羊抗鼠IgG，以指示试剂盒反应系统工作是否正常。质控线的出现与苯二氮卓类或其代谢物的存在无关。质控线色带的出现表明：①样品加入量充足②样品在纸条上运行正常。

本发明的第二方面还提供了上述苯二氮卓类药物的检测试剂盒的制备方法，包括下列步骤：