[发明专利]一种苯二氮卓类药物检测试剂盒及其制备

权利要求书

1.一种苯二氮卓类药物的检测试剂盒，包括试剂条，试剂条从加样端开始依次为滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫胶体金纸片为包被有胶体金标记的抗苯二氮卓单克隆抗体的玻璃纤维垫片，所述免疫硝酸纤维素膜为设有检测线和质控线的硝酸纤维素膜，所述检测线上包被有苯二氮卓-牛血清白蛋白复合物，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。

2.如权利要求1所述苯二氮卓类药物的检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金标记的抗苯二氮卓单克隆抗体中，胶体金的粒径为39-42nm，纳米金与抗苯二氮卓单克隆抗体的标记比例为2分子纳米金标记1分子抗苯二氮卓单克隆抗体。

3.如权利要求1或2所述苯二氮卓类药物的检测试剂盒的制备方法，包括下列步骤：

1)用两步还原法制备平均粒径为39-42nm的胶体金；

2)采用步骤1制得的胶体金标记抗苯二氮卓单克隆抗体获得免疫胶体金；

3)采用喷金缓冲液稀释步骤2)的免疫胶体金获得免疫胶体金溶液，用免疫胶体金溶液喷涂经预处理的玻璃纤维垫片，制得免疫胶体金纸片；

4)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷点苯二氮卓-牛血清白蛋白复合物及羊抗鼠IgG，制得免疫硝酸纤维素膜；

5)将滤样纸、步骤3)制备的免疫胶体金纸片、步骤4)制备的免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁制得检测试剂条；最后将检测试剂条装入塑料盒制得检测试剂盒。

4.如权利要求3所述苯二氮卓类药物的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤1)所述两步还原法制备平均粒径为39-42nm的胶体金具体包括下列步骤：

a)第一次还原氯金酸溶液：

制备浓度为0.0004-0.0005mol/L的HAuCl₄水溶液，加热煮沸20-30分钟，之后边搅拌边加入柠檬酸三钠水溶液，HAuCl₄与柠檬酸三钠的摩尔比为1∶(8-9)，超声振荡2-3分钟后冷却至室温，既制得14～16nm粒径的胶体金原溶液；

b)第二次还原氯金酸溶液：

将a)制得的胶体金原溶液放置于4.0-4.5℃恒温冰浴中稳定温度，随后按胶体金原溶液与HAuCl₄水溶液体积比1∶(1.9-2.0)加入4.0-4.5℃的0.003-0.004mol/L HAuCl₄水溶液，随后立即边搅拌边滴加4.0-4.5℃的抗坏血酸与PVP的混合水溶液，加入的抗坏血酸与本步骤加入的HAuCl₄的摩尔比为(25-26)∶1，加入的PVP与本步骤加入的HAuCl₄的重量比为1∶(2.0-2.1)，反应中保持温度恒定，搅拌至反应完全，溶液呈透明的酒红色，既制得39-42nm粒径的胶体金溶液；

两步还原法中，配置各种水溶液均采用双蒸水。

5.如权利要求4所述苯二氮卓类药物的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤a)中，加入柠檬酸三钠水溶液的浓度为0.01-0.02mol/L；超声震荡的频率为20-30KHZ。

6.如权利要求4所述苯二氮卓类药物的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤b)中，所述抗坏血酸与PVP的混合双蒸水水溶液中，抗坏血酸的浓度为0.017-0.019mol/L，PVP的浓度为0.137-0.139g/L。

7.如权利要求3所述苯二氮卓类药物的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤2)中纳米金与抗苯二氮卓单克隆抗体的标记比例为2分子纳米金标记1分子抗苯二氮卓单克隆抗体。

8.如权利要求3所述苯二氮卓类药物的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤3)免疫胶体金纸片的制备包括下列步骤：

I.用喷金缓冲液稀释步骤2)的免疫胶体金，获得OD₅₄₀值为1.2～2.0的免疫胶体金溶液；

II.用预处理液浸泡玻璃纤维纸，干燥后，再用免疫胶体金溶液喷涂玻璃纤维纸，干燥，制得免疫胶体金纸片。