[发明专利]培养基中含腐植酸钠饲料用枯草芽孢杆菌生物制剂的生产

说明书

技术领域

本发明涉及微生物生物制剂，具体的说是一种培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法。

背景技术

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，是芽孢杆菌属的一种，单个细胞0.7～0.8×2～3微米，革兰氏阳性菌，无荚膜，周生鞭毛，能运动。芽孢大，椭圆到柱状，0.6～0.9×1.0～1.5微米，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙，污白色或微黄色，在液体培养时，常形成皱醭。枯草芽孢杆菌具有繁殖速度快、耐高温、耐酸碱、耐挤压、稳定性能好、应用范围广等特点，在现代分子遗传学的科研探索中常作为模式菌株，在现实的生产实践中广泛应用于食品工业、饲料工业、水产养殖、环境保护和保健医药等诸多方面；因此，愈来愈受到科技工作者和企业界人士的重视。

枯草芽孢杆菌菌体及其分泌物中含有丰富的蛋白质、氨基酸、有机酸、维生素、不饱和脂肪酸、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和肽类抗生素等生物活性物质。因此，在畜禽养殖和水产养殖中均有较高的应用价值。

在以往研究中，科技工作者对枯草芽孢杆菌的分类学地位、生理生化特征、发酵条件及其调控等方面均有深入研究。近年来，对枯草芽孢杆菌应用研究也取得很大的进展。但对饲料用高浓度枯草芽孢杆菌发酵技术报道的并不多，对培养基含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的研制与生产未并见报道。

本发明采用枯草芽孢杆菌菌株，经一级固体种子培养，液体二级种子发酵培养，采用含有腐植酸钠的固体培养基进行有氧发酵，再经调整培养条件出芽孢处理，干燥、粉碎，生产出培养基含腐植酸钠、饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂产品。此工艺设计和生产尚属国内和国际首创。

腐植酸钠是大分子有机物质，主要是羟基、酚羟基、甲氧基、醌基等。综合各项报道，腐植酸应用在畜禽饲料中可对肠道炎性物和有毒物质进行吸附，对肠粘膜起保护作用；可抑制和杀灭肠道致病菌，提高饲料的利用率，并有止血止痛作用；可吸附粪便中的氨气、硫化氢，减轻粪便的臭味；腐植酸钠资源广泛、价格低廉、无药物残留，没有任何配伍禁忌，利于环保。但腐植酸的活性基团常被杂质所封闭，几乎不能发挥作用，通过发酵处理可以大大提高其生物学活性。将腐植酸钠作为芽孢菌制剂培养基使用，必将提升制剂生物效能。

本发明产品功能是：1.利用芽孢菌产酶能力强的特点，提高饲料利用率；2.芽孢菌进入胃肠后，经过复苏增殖，可消耗肠道氧，有利于乳酸、双歧等厌氧益生菌发挥作用；3.腐植酸钠经微生物发酵后，生物活性增强，对芽孢菌作用具有增效性；4.芽孢菌进入后肠后甚至排除体外后还能发挥作用，可显著改善养殖环境。

培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂产品无毒、无害、无任何副作用，是一种绿色的微生物制剂添加剂，具有广阔的市场前景。

目前，在畜禽养殖和水产养殖中，提高蛋白质利用率，减少抗生素使用是急需解决的问题。而本发明恰恰非常有助于解决上述两个问题或难题。产品已在广东、湖北、江苏、河北、山东、北京、沈阳、大连等地区广泛应用，取得了很好的经济效益和社会效益。

发明内容

本发明目的在于提供一种培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：以枯草芽孢杆菌为菌株，经一级固体种子培养，二级液体种子发酵，生产出枯草芽孢杆菌种子液。以葡萄糖、腐植酸钠、豆粕、玉米、麦麸等为主要培养基，将种子液接种于培养基上进行三级固体有氧发酵，之后调整培养条件进行出芽孢处理，再经干燥，粉碎，生产出含枯草芽孢杆菌(cfu)≥200亿个/g，pH值5.6～6.6，水分≤10％，粒度≥100目，色泽呈现特有的浅灰色或灰黑色、保质期18个月的生物制剂产品。

一种培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法，包括如下步骤：

1)单菌落种子纯化与优选：将枯草芽孢杆菌斜面菌种，在盛有细菌培养基的培养皿上涂布，经培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；

2)一级固体种子培养：将步骤1)中得到的单菌落种子接种到200ml茄形瓶，经培养，得到一级固体种子；