[发明专利]用乙肝病毒核心颗粒展示抗原表位的载体、动物疫苗及其制备方法无效
| 申请号： | 201110454945.7 | 申请日： | 2011-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN103184231A | 公开（公告）日： | 2013-07-03 |
| 发明（设计）人： | 陈永福;张国华;郑立;于娟娟;张岩松 | 申请（专利权）人： | 北京中农创新生物工程研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/51;C07K14/02;A61K39/29;A61P31/20;A61P1/16 |
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| 地址： | 100193 北京市海淀区天*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 乙肝病毒 核心 颗粒 展示 抗原 载体 动物 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.一种用乙肝病毒核心颗粒展示抗原表位的载体，其特征在于：所述载体由基因克隆载体pUC18以及克隆到pUC18载体上的一个DNA片段组成，所述DNA片段的基因序列如SEQ ID NO：1。
2.一种用乙肝病毒核心颗粒展示抗原表位而制备动物疫苗的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)使用乙肝病毒核心蛋白质真肽1-149位氨基酸的编码DNA序列为骨架；
(2)去掉所述骨架中组成钩状突起的79-82位氨基酸编码；
(3)在所述79-82位氨基酸编码的部位插入柔性肽GGGGSGGGGGGGGSGGGGS的编码DNA序列；
(4)在所述柔性肽编码DNA序列之中插入氨基酸TPGGA的编码DNA序列，形成三个核酸内切酶识别位点，从而形成一个DNA片段；
(5)将所述DNA片段克隆到基因克隆载体pUC18中，形成用乙肝病毒核心颗粒展示抗原表位的载体；
(6)在所述核酸内切酶识别位点插入需展示的抗原基因，完成基因重组；
(7)把基因重组后的载体转移到大肠杆菌或动物细胞表达载体上进行基因表达，产生融合蛋白；
(8)生产融合蛋白产品。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤7采用大肠杆菌表达载体进行基因表达，所述步骤8进而包括以下步骤：
(1)分离包涵体；
(2)洗涤包涵体；
(3)溶解包涵体；
(4)产品纯化；
(5)蛋白质重新折叠。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤7采用动物细胞表达载体进行基因表达，所述步骤8进而包括以下步骤：
(1)融合蛋白分泌到细胞培养液中；
(2)把细胞培养液加在层析柱上，使其流过亲和层析介质，产品得以纯化。
5.一种动物疫苗，其特征在于：所述动物疫苗采用如权利要求2至4任一项所述的方法制备而成。
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