[发明专利]一种检测抗双链DNA抗体的试剂装置及其方法

说明书

技术领域

本发明申请涉及一种检测抗双链DNA抗体的试剂装置及其方法，属于临床免疫学检测技术领域。

背景技术

系统性红斑狼疮(SLE)是一种波及全身结缔组织，使多脏器受损害之慢性炎症性自身免疫性疾病。该病是一种累及多个系统，以慢性非化脓性炎症为特征，临床表现复杂多样化的结缔组织病，病因尚不完全明确，一般认为可能属于多因素性，即与遗传因素、病毒感染、内分泌因素、药物因素、环境因素等有关。

脱氧核糖核酸(DNA)作为抗原可以是双链DNA(dsDNA)或单链DNA(ssDNA)，其抗体也就有抗dsDNA抗体和抗ssDNA抗体两型。抗dsDNA抗体是一种能够与天然DNA结合的自身抗体，在90％以上活动的SLE病人血清中均存在抗dsDNA抗体。dsDNA抗体与SLE的病理变化、活动性、疗效及预后有很密切的关系，已经成为SLE的血清学诊断的主要标志，对诊断SLE有较高的特异性。在SLE发病初期出现IgM型抗体，随后出现IgG型抗体。通常情况下IgG型抗体较IgM型诊断价值高。

临床检测抗双链DNA抗体的常见方法包括金标法、免疫双扩散法、间接免疫荧光法、化学发光法、放射免疫分析法、酶联免疫吸附试验的方法，但这些方法都存在着不足之处。

一、金标法

金标法是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，胶体金已经广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

该方法快速、敏感性高，但其特异性差，假阳性率较高，且只能做定性检测，不能定量。

二、免疫双扩散法

免疫双扩散法是抗原与抗体分子在凝胶空间网络内自由扩散，当其相遇时，在比例合适处会形成免疫复合物沉淀线。该方法不用很多的特殊仪器，价格低廉，特异性高。但其操作费时费力，需要用肉眼来观察沉淀环，结果灵敏度低，判断不客观，对实验室技术人员的技术水平和经验要求较高，不同操作人员甚至是同一操作人员不同次操作结果的一致性较差。

三、间接免疫荧光法

该法的基本原理是用特异性的抗体与载玻片中的抗原结合后形成抗原抗体复合物，继用荧光抗体与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗体。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的荧光素抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的：

(1)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别；

(2)操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也不太适用于标本量较多的实验室；

(3)荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难；

(4)结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足；

(5)只能进行定性检测，不能进行定量测定。

四、化学发光法

化学发光法是由于化学反应放出的能量所引起的光辐射，是物质在进行化学反应时伴随的一种发光现象。它不需要任何光源，只需要高灵敏度的光电转换元件和电子放大装置来测量发光强度进行定量分析，但反应必须提供足够的激发能。通常只有那些反应速度相当快的放能反应，方能在可见光范围内产生化学发光。

五、放射免疫分析法

放射免疫分析法是利用同位素标记的与未标记的抗原，同抗体发生竞争性抑制反应，是一种在无须采用生物测定方法的情况下用于检测抗原的实验室测定方法。

该法极其敏感而又极其特异，但其却需要具备尖端复杂的设备，且成本也不低。同时，还需要特殊的预防措施，因为其要用到放射性物质。因此，如今放射免疫分析法在很大程度上已经被ELISA所取代。

六、酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法(ELISA)被广泛应用于检测抗双链DNA抗体，但该方法也存在着下述的不足之处：

(1)使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；

(2)定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐；